葛根素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的干预作用

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1、葛根素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的干预作用【摘要】目的观察葛根素对大鼠心肌缺血再灌注损伤后炎症反应的抑制作用并探讨其作用机制。方法36只SD大鼠随机分成假手术组、模型组和葛根素处理组;采用左冠状动脉结扎法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,于缺血开始及再灌注即刻由尾静脉注射葛根素20mg/kg，缺血1h，再灌注6h后取血检测缺血再灌注后心肌髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)和血清磷酸肌酸激酶(CK)含量，RTPCR测定缺血再灌注后心肌胞间黏附分子1(ICAM1)mRNA含量。结果葛根素组血清CK明显低于模型组(P&

2、lt;0.01)，MPO和MDA的活性明显低于模型组(P<0.01)，ICAM1mRNA含量较模型组低(P<0.01)。结论葛根素可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤后炎症反应,这可能是其发挥心肌保护机制之一。【关键词】葛根素;再灌注损伤;胞间黏附分子1近年研究证明,心肌缺血再灌注损伤后氧自由基产生与炎症反应是引起继发性心肌损伤的关键因素。在缺血心肌组织内,大量的中性粒细胞和单核细胞聚集、浸润,阻塞微血管,造成“无复流”现象,并且聚集的中性粒细胞和单核细胞释放氧自由基、蛋白质分解酶及各种炎性介质加重心肌损伤〔1〕

3、;缺血区微血管内皮细胞黏附分子的上调,是中性粒细胞和单核细胞聚集、浸润的先决条件〔2〕。药理实验研究显示，葛根素具有保护心肌缺血再灌注损伤作用〔3〕，但这种作用是否与葛根素抑制心肌缺血区细胞黏附分子表达上调相关，目前还不清楚。本实验通过观察葛根素对大鼠心肌缺血再灌注损伤后炎症反应以及缺血区细胞黏附分子表达的影响,探讨其心肌保护作用机制，为临床用药提供理论依据和参考。　　1材料与方法　　1.1药物和试剂布瑞宁(注射用葛根素,北京四环科宝制药有限公司生产,0.1g/支,批号H20010776);肌酸激酶(CK)活力试剂盒、髓

4、过氧化物酶(MPO)试剂盒和丙二醛(MDA)试剂盒购自南京建成生物工程研究所;总RNA提取试剂购自美国Gibco公司;小鼠白血病病毒反转录酶(MMLV)、寡核苷酸引物购自美国Promega公司;耐热DNA(TaqDNA)聚合酶、核糖核酸酶抑制剂(RNasin)等试剂购自深圳华美生物工程公司。　　1.2大鼠心肌缺血再灌注损伤模型参照　　3讨论　　随着心肌缺血机制研究的日益深入，炎症反应在心肌缺血再灌注的作用引起关注。在心肌缺血的情况下，活化的白细胞作用于血管基底膜而进入心肌组织，浸入的白细胞主要是中性粒细胞和单核细胞，M

5、PO是这两种细胞特有的酶，白细胞通过阻塞小血管、释放化学介质和自由基等参与内皮细胞的损伤，改变血管内皮细胞的通透性。所以缺血再灌注组织中白细胞的存在不仅是损伤的病理反应，而且促进缺血再灌注的损害。本实验研究显示：缺血心肌中MPO、MDA和血清中CK活性显著升高，即缺血区发生炎症反应，且浸润的白细胞产生自由基增多，从而诱导心肌组织受伤加重。而葛根素处理组MPO、MDA和血清中CK活性显著下降，说明葛根素能减轻炎症介导的缺血再灌注损伤。　　白细胞穿过血管进入病灶需要ICAM1的介导，ICAM1是一种淋巴细胞功能相关抗原

6、1(Lymphocytefunctionassociatedantigen1)的配体，主要介导白细胞和内皮细胞黏附，使白细胞游出血管壁。在正常情况下，内皮细胞表达极微量的ICAM1，白细胞极少和内皮细胞黏附。在缺血再灌注时，内皮细胞和白细胞被病变组织产生的大量组织激活，ICAM1表达增高〔6〕，使白细胞和内皮细胞黏附增强，造成白细胞和内皮细胞大量牢固黏附，堵塞微循环，影响心肌组织的血液供应;此外，浸润于心肌的白细胞产生大量的自由基、水解酶、炎症介质和细胞因子等，损伤局部血管，使心肌细胞缺血、缺氧，甚至死亡，并吸引更

7、多的白细胞进入心肌，形成恶性循环，所以黏附分子的表达是白细胞发挥毒性作用的重要条件〔7〕。研究发现，心肌缺血再灌注损伤中ICAM1明显升高,且与心肌损伤一致〔8〕;本实验中，模型组ICAM1mRNA量明显高于对照组，且与MPO、MDA和血清中CK活性变化一致。　　ICAM1介导的炎症反应在心肌缺血再灌注损伤中的作用越来越受到关注，寻找新的方法预防这种炎症反应以减轻心肌缺血再灌注损伤是目前的研究热点。本实验通过观察葛根素对白细胞浸润、自由基产生、心肌损伤程度和ICAM1mRNA含量的影响研究葛根素对心肌缺血再灌注的

8、保护作用，表明葛根素有减轻白细胞和内皮细胞的黏附作用，减少自由基产生，从而减轻心肌缺血再灌注中的炎症反应，达到保护心肌的作用。【参考