植物病害检疫检验技术真菌

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1、第四章植物病害检疫检验技术第一节植物检疫性真菌常见检疫检验技术直接检验比重检验染色检验洗涤检验保湿萌芽检验分离培养检验1、适用范围混杂在种子间的较大病原体（线虫瘿、菌核）污染大量病菌孢子的种子（小麦腥黑穗病）种子带明显病症的病粒（小麦黑胚病）（一）直接检验-----肉眼检验小麦黑胚病粒腥黑穗病在检查时应先进行外表和周围的检查，然后，由表及里仔细观察病害症状、菌瘿、菌核等病症。对于苗木、接穗、插条等，应注意茎、叶、芽、根各部位，并需检查粘着和夹带的土壤。对块茎、块根以及鳞茎，应特别注意芽眼、凹陷处、伤口和附着的土壤。主要工具：放大镜

2、或解剖镜。检查要求：2、检验方法：将送验样品分出一半试样，放在白纸或白色塘瓷盘中，检出线虫瘿、麦角菌、黑粉菌球、菌核及病粒，称其重量，计算病害感染率。病害感染率(%)=病（粒）原体重量(g)试样重量(g)×100%3、注意无病征的种子不一定是无病的种子。不同的病害可以表现类似的症状，同一病害也可产生不同的症状。在确定某种病害时，须与其他方法配合使用。1、适用范围检查混杂在种子内较大的病原体如菟丝子、菌核、线虫瘿和杂草种子等。利用病原体与种子形状、大小的不同，通过一定的筛孔将病原体筛出来，然后进行分类称重。（二）过筛检验大豆菟丝子为

3、害2、检验方法将送验样品分出一半作为试样，用规定孔径的筛子过筛。各层样品倒入白瓷盘内检查，最下层的杂质倒入黑玻璃盘中用肉眼或放大镜检查。病原体含量(%)=病原体重量(g)试样重量(g)×100过筛检验主要用于检验粮谷、种子、油料、干果和生药材。1、适用范围：种子表面带病而肉眼看不见的种子病害。（附着在种子表面的病菌孢子）（三）洗涤检验小麦矮腥黑穗病菌洗涤检验法原理：主要用于检查附着在种子表面的各种真菌孢子。种子表面常附着真菌孢子，将一定量的样品放入容器内，加一定量的无菌水，充分振荡，可使病菌孢子洗涤下来，而后离心后，可沉淀，镜检沉

4、淀物可确定其种类和数量。主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、0.1％吐温溶液等2、检验方法：样品制备：取样(5g)2份于100ml三角瓶内，加蒸馏水10ml（加0.1％吐温溶液），振荡5～10min，显微计数：悬浮液2000～3000r/min离心5～15min，吸去上清液，留1ml沉淀部分，滴于5个载玻片，加盖玻片镜检，每片检查10个视野，并计算每视野平均孢子数N=n1×n2×n3/m式中：N－－每克种子的孢子负荷量n1－－每视野平均孢子数n2－－盖玻片面积上的视野数n3－－1ml水的滴数m－－供试样品的重量（g）如果镜检洗

5、涤液时，没有检查到病菌孢子，则对同一样品要重复几次取样洗涤，对每一洗涤液至少要镜检5张玻片。当一个样品两次取样，洗涤检验的结果相差很大时，则需要重复一次。检验结果有四个影响因素：a．种子或其他粮谷类产品表面所粘附的病菌孢子，不一定能完全洗涤下来。b．在离心管内，悬浮液表面常形成一层极难沉降的孢子薄膜，而管壁上也可能粘附着孢子，使检验结果很难代表实际情况，因而影响计算的准确性；c．将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀，造成一些视野间孢子分布极不均匀，这也影响计数的准确性，都可能增加误差程度；d．操作不够严格，会造成人为误差，以及制样

6、中也会出现偏差。原理：由于菌瘿、菌核、病秕粒，都要比健康籽粒轻。若将其浸入一定浓度的食盐水（糖、泥土等）或其他溶液中时，就会浮于液面。捞取浮物，结合解剖镜进行检验，即可鉴定其种类。（四）比重检验法比重检验法一般用于检验种子、粮谷、豆类中的菌瘿、菌核和病秕籽粒等。原理：某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原物本身，常可用特殊的化学药品处理，使其染上特有的颜色，帮助检出和区分病虫种类。这种方法即为染色检验法。例如：马铃薯癌肿病（薯块上癌瘤不明显时，可做徒手切片，加1滴1％的“藏花红”染色液，健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈

7、暗红色。麦类赤霉病的检验：将病粒放在0.5-1%对硝基苯胺酒精溶液中，经2-3小时，受侵染部分或有菌丝分布的部分呈现暗红色至咖啡色，而未受侵染部分为黄色，50℃温度下颜色更明显。（五）染色检验法（六）解剖检查法有许多病害或一些病害初发生阶段，在种子、苗木及其他植物产品表面没有明显的症状，诊断比较困难有时为要了解病原物潜伏的场所，常常需要用解剖检验进行鉴定，如散黑穗病菌以菌丝体在胚中越冬,有的果树病害以菌丝体在花芽或鳞片中越冬。解剖检验主要采用徒手切片或切片机切片，经过染色，制成玻片标本后，放在显微镜下观察鉴定。对于某些病害或种子苗

8、木及其产品，有时采用粗放的解剖方法也可进行检查。（七）保湿萌芽检验原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出病菌。主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。常规植物病理学方