大孔吸附树脂分离纯化草珊瑚总黄酮的工艺研究

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1、大孔吸附树脂分离纯化草珊瑚总黄酮的工艺研究【摘要】目的研究大孔吸附树脂分离纯化草珊瑚总黄酮工艺，为草珊瑚总黄酮的工业化生产提供实验依据。方法以贵州产草珊瑚为原料，以草珊瑚总黄酮含量及回收率等为考察指标，选用大孔吸附树脂对草珊瑚总黄酮进行分离纯化，分别采用静态试验、动态试验等考察大孔树脂对草珊瑚总黄酮的分离纯化效果及影响因素。结果AB-8型大孔吸附树脂对草珊瑚总黄酮静态饱和吸附量为116.25mg·g-1（干树脂），洗脱率92.9%，动态饱和吸附量为94.5mg·g-1（干树脂），总黄酮回收率在96.1%、纯度在9

2、0%以上，是实验树脂中分离纯化草珊瑚总黄酮的最佳大孔吸附树脂。结论分离纯化草珊瑚总黄酮最佳工艺条件为：AB-8型大孔吸附树脂，洗脱剂为70%乙醇，洗脱剂用量为3倍树脂体积，流速3～4ml/min，上柱总黄酮量与树脂比为1∶10.5，上柱液总黄酮浓度为19.8mg/ml，流速2～3ml/min，冲洗杂质用水体积2～3BV，上柱液pH值4～5。【关键词】大孔树脂草珊瑚总黄酮分离纯化　　Abstract:ObjectiveAmethodforseparationandpurificationoftheflavonoid

3、sfromSarcandraeglabraacroporousresing·g-1,thestaticelutionratioicabsorptioncapacityofAB-8typeresing·g-1,therecoveryrateorethan96.1%andthepurityorethan90%.AB-8typeresinumconditionsis:AB-8typemacroporousresin,theeluantis70%alcoholand3timesasthevolumeoftheresin,

4、thevolumeoftheresinis10.5timesofflavonoidsinsample,concentrationofflavonoidsofsampleis19.8mg·ml-1andcurrentvelocityof2～3ml·min-1,pHvalueofsampleis4～5.　　Keya公司产品、含量大于98%；大孔吸附树脂：D3520型，AB-8型，NKA-9型，D4020型，S-8型（南开大学化工厂）。TU-1800紫外可见分光光度计（北京普析），RE－52旋转蒸发仪（上海亚荣），不锈

5、钢提取锅（武汉立中），PHSJ－3F精密酸度计（上海雷磁），ALG5/10自动灌装封口机（上海国彩），电子天平（美国奥豪斯），恒温水浴箱(上海医疗器械厂)；鼓风干燥箱(上海实验仪器厂)；植株样本粉碎机(上海实验仪器厂)；液体自动混合机（北京长安仪器厂）。　　2方法与结果　　2.1草珊瑚总黄酮的测定方法　　草珊瑚总黄酮的测定方法采用芦丁比色法［5］，测定波长500nm，回归方程：C=84.317A-0.77361，(r=0.9998)，吸光度线性范围：0.1～0.6，加样回收的平均回收率99.37%，RSD=1.8

6、5%（n=6）；精密度测定RSD=0.95%。　　2.2草珊瑚总黄酮纯化用样品液的制备取草珊瑚全草（除根）干品粗粉500g，根据作者已有试验L9（34）正交设计筛选出的草珊瑚总黄酮乙醇浸提最优水平组合工艺：即采用60%乙醇、80℃温度，3h/次，提取3次进行提取制备，制得草珊瑚总黄酮提取液（总黄酮含量：9.5mg·ml-1）冷藏备用。　　2.3大孔吸附树脂的筛选［6～8］将D3520型、AB-8型、NKA-9型、D4020型、S-8型树脂先用4倍体积量95%乙醇或丙酮浸洗均可，至浸洗液加适量蒸馏水无白色浑浊现象时

7、止，用水反复清洗干净至无醇味或无酮味，加入4倍体积量2mol·L-1的氢氧化钠溶液，浸泡12h，以水洗至中性；再加入4倍体积量4mol·L-1的盐酸，浸泡12h，用蒸馏水洗至中性后60℃烘干备用。精密称取经上述预处理的干树脂1g共3份，置100ml三角瓶中，精密加入2.2项下制取的样品液20ml后震荡吸附，頻率120次/min，1分钟间隔振荡2h，然后静置20h，使其达到饱和吸附，吸取上层液测定总黄酮浓度，按下式计算树脂饱和吸附量：饱和吸附量=［（初始浓度-吸附后浓度）×吸附液体积］/树脂量（mg·g-1干树脂）

8、，取三次平均值。将经静态饱和吸附总黄酮后树脂滤出，吸干表面水分，精密加入60%浓度的乙醇20ml后同上法震荡2h后滤出，测定洗脱液总黄酮的浓度，计算洗脱率：洗脱率=［洗脱液浓度×洗脱液体积］/饱和吸附量×100%，取3次平均值。结果见表1。表15种树脂对草珊瑚总黄酮的静态饱和吸附洗脱结果（略）上述结果表明5种大孔吸附树脂对草珊瑚总黄酮的静态饱和吸附量均在90mg以上，以A