丹参有效成分的分离与提取

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1、丹参有效成分的分离与提取【关键词】丹参；隐丹参酮；丹参酮ⅡA丹参为唇形科多年生草本植物,丹参的干燥根及根茎，主产于四川、安徽、江苏及河南等省。春秋两季采挖，除去茎叶泥沙，须根晒干。其根茎短粗，顶端有残留茎基，根数条，长圆柱形，略弯曲，有的分枝并有须状细根，长10-20cm，直径0.3-1cm，表面棕红色或暗棕红色，粗糙，具纵皱纹，老根外皮疏松，多显紫棕色，常呈鳞片状脱质硬而脆，断面疏松，有裂隙或略平整而致密，皮部棕红色，本部灰黄色或紫色，导管束黄白色，呈放射状排列，气微，味微苦涩。丹参有效成分主要有脂溶性非醌色素类化合物，如丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮及其异构

2、体。水溶性酚酸类成分如原儿茶醛、丹参素。其中，隐丹参酮是抗菌的有效成分。1材料与方法1.1材料与试剂丹参粉末，乙醇，苯，氧化铝，丙酮。1.2实验方法取丹参粉末，用乙醇热煮，煮沸15-20min，用苯洗脱过滤，洗脱液经氧铝(Ⅲ级)层析，再用苯洗脱，样品呈紫色样段，橙红色样段，暗红色样段，取橙红色样段经过苯洗脱，再用丙酮洗脱，呈板状结晶，为丹参酸甲脂，呈橙红色结晶，为隐丹参酮。将暗红色样段，氧化铝棒置容器中，经苯洗脱，再用丙酮洗脱，呈暗红色结晶，为丹参酮ⅡA。隐丹参酮与丹参酮ⅡA为脂溶性成分，样品的甲醇提取液，回收溶剂至干，残渣溶于氯仿期滤，滤液加水振摇静止，取氯仿层

3、浓缩至干，加氯仿显色。原儿茶醛、丹参素为水溶性成分，用荧光法鉴别。取本品粉末，置白瓷板上，于紫外灯(365mm)下检视，呈灰色荧光，即原儿茶醛。薄层色谱法:样品水提液，浓缩后，以80%醇沉，用盐酸调值，pH2，乙醚萃取，醚提取液挥去乙醚，用乙醇溶液，点于硅胶G(或H)—羧甲基纤维素钠薄层板上，先以苯—乙酸—乙甲酸(4∶4∶1)展开1cm取出挥溶剂再以苯—乙酸乙酯—甲酸(80∶50∶8)展开，以三氯化铁—铁氰化钾(1∶1)试剂显色。1.2.1指纹图谱参照高效液相色谱法(《中国药典》2000版1部VID)测定。系统适用性试验十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，流速0.5mL

4、/min，检测波长为281nm，理论板数按原儿茶醛峰计算，应不低于5000，见表1、表2。表1二元梯度洗脱参数表2特征峰相对保留时间表3特征峰标准相对峰面积1.2.2对照品溶液的制备取原儿茶醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成相当于每2mL含原儿茶醛0.01mg的溶液，摇匀，即得。1.2.3供试品溶液的制备取含量测定项下供试品溶液。1.2.4测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10mL，注入液相色谱仪，根据色谱峰面积，按照指纹图谱技术要求测定，即得。1.2.5确定10个特征峰1号峰为丹参，2号峰为原儿茶醛(参照物S)，10号峰为丹酚酸B。指纹图谱见图1。图1丹

5、参HPLC指纹图谱1.2.6丹参素的鉴别1.2.6.1取本品粉末5g，加水50mL，煎煮15-20min，放冷，滤过，滤液置水浴上浓缩至粘稠状，放冷后，加乙醇3-5mL使溶解，滤过，取滤液数滴，点于滤纸上。午后，置紫外线灯(365nm)下观察，显亮蓝灰色荧光，将滤红悬挂在浓氨溶液瓶中(不接触液面)，20min后取出，置紫外灯(365nm)下观察，显亮蓝灰色荧光。1.2.6.2取前项下的滤液0.5mL，加三氯化铁液1-2滴，显污绿色。1.2.6.3取本品粉末1g加乙醇0.5mL，置具塞试管中，振摇，放置1h，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1mL溶解作为供试品溶液。另

6、取，丹参对照药材1g，同法制成对照液药材溶液再取丹参酮ⅡA对照品加醋酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版的1部附录VIB)试验，吸取上述3种溶液各5mL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。1.2.7原儿茶醛的鉴别1.2.7.1样品的水提液浓缩用盐酸调至pH2，乙醚萃取，醚提液挥去乙醚，用乙醇溶解，点于硅胶G(或H)CMC板上，以苯乙酸乙酯甲醇(80：50：

7、8)展开。以氯化铁铁氰化钾(1∶1)试剂显色。1.2.7.2样品前项下的制备点样液。点于硅胶HCMC板上，以(Ⅰ)苯乙酸乙酯甲酸(80∶70∶8)或(Ⅱ)氯仿丙酮甲醇甲酸(70∶20∶15∶5)展开，紫外灯下检视后喷三氯化铁、铁氰化钾(1∶1)试剂，再将薄板置0.1MHCL中泡数分钟，流水冲去酸液显色。2实验结果2.1化学结构见图2。图2参照高效液相色谱法(《中国药典》2000版1部VID)测定。2.2系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；甲醇水醋酸(8∶91∶1)为流动相；检测波表为281nm。理论板数按丹参素峰计算，应低于2000。2.3对

8、照品溶液的