mxc对小鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响

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1、MXC对小鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响王宝平，马向东，马佳佳，陈必良【摘要】目的：研究甲氧滴滴涕（MXC）对颗粒细胞凋亡的影响，探讨MXC对雌性小鼠性腺毒性的作用机制.方法：以孕马血清（PMSG）处理的雌性昆明小鼠为模型,制备颗粒细胞悬液,以不同浓度的MXC（1.25,2.50，5.00和10.00μg/mL）对其作用24，48h后,应用TUNEL法及流式细胞术,检测MXC对离体培养颗粒细胞凋亡的影响.结果：体外培养的颗粒细胞存在自发性凋亡，对照组和MXC不同浓度实验组的颗粒细胞都有不同程度的体积变小、细胞浓缩、变圆、离壁等类似凋亡的特征.MXC1.25μg/mL浓度组凋

2、亡的颗粒细胞最少,其余3个实验组随MXC浓度的升高,凋亡细胞也逐渐增多,MXC10.00μg/mL浓度组的颗粒细胞凋亡数量显著高于对照组和其他各组(P0.05).采用3＇末端原位标记法在细胞中检测到棕色深染的凋亡颗粒细胞；流式细胞术分析结果显示处于早期凋亡的细胞所占百分率明显升高(最高达53.5%).结论：环境污染物高浓度MXC可抑制除血清后体外培养的颗粒细胞生长,导致颗粒细胞凋亡,它的作用是双向的并具有剂量依赖性.【关键词】甲氧滴滴涕;卵泡颗粒细胞;细胞凋亡;小鼠　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetherelationshipbetalegonad

3、toxicityofmethoxychlor(MXC)onmouseandtheapoptosisofgranulosacells.METHODS:Pregnantmaresserumgonadotrophin(PMSG)treatedfemaleKunmingmiceodelsandgranulosacellsuspensionsL)ethodandfloetry.RESULTS:ThereentalgroupstreatedLgroup,andthenumberofapoptosislikegranulosacellsincreasedgraduallyinothe

4、r3testgroupsberofapoptosislikegranulosacellsLgroupthanthatinothergroups(P0.05).Apoptoticsignalsethodingranulosacellsofmouse.Floetryrevealedtheincreasingproportionofearlystageapoptoticcells(themaximumayserveasanimportantendocrinedisruptingchemical(EDC),mediatingmousegranulosecellapoptosisi

5、nvitroafterFBSovedfrommedium.Theeffectisbidirectionalandconcentrationdependent.　　【Keyethoxychlor;granulosecell;apoptosis;mouse　　0引言　　甲氧滴滴涕(methoxychlor,MXC)是一种被人们主动投放于环境中的数量最大、毒性最广的化学物质，因其杀虫效果明显，被人们广泛应用于水果，蔬菜和园林中杀虫.近年来，MXC的生殖毒性作用不断被发现〔1〕,有研究表明长期接触MXC可导致生育能力下降〔2-3〕和异常胚胎细胞的形成〔4〕，但其生殖细胞的毒性作用机制

6、仍不清楚，有关是否对卵泡颗粒细胞的生存具有影响的报道少见.本研究以小鼠离体培养的颗粒细胞为模型，观察具有雌激素样作用的环境污染物MXC对颗粒细胞存活的影响，以探讨MXC的雌性生殖细胞毒性作用机制.　　1材料和方法　　1．1材料健康，尚未性成熟的雌性昆明小鼠40只，体质量18～22g（第四军医大学实验动物中心）；甲氧滴滴涕（批号：49054，美国Sigma公司）；DMEM/F12干粉细胞培养基，无脂肪酸牛血清白蛋白（BSA）（美国Gibcol公司）；已二胺四乙酸（EDTA）、孕马血清(PMSG）（天津生物制品公司）；无Ca2+,Mg2+磷酸盐缓冲液（PBS）（北京中杉金桥公司）

7、；3＇OH末端原位细胞凋亡检测试剂盒、多聚赖氨酸、DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)；流式细胞仪（美国EPICS公司）.　　1．2方法　　1．2．1小鼠颗粒细胞的制备及原代培养参照文献〔5〕的方法制备颗粒细胞，选取小鼠，皮下注射PMSG，10U/只，饲养温度22℃，12h光照，12h黑暗，允许自由饮水和摄食.48h后颈椎脱臼处死，无菌条件下迅速取出双侧卵巢，用PBS（-）清洗3次，在体视显微镜下除去卵巢周围包膜及脂肪组织.将卵巢置于DMEM/F12培养液中，37℃孵育15min.然后在解