反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶液的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶液的含量论文卢来春，张蓉，刘同华，蒋学文【摘要】目的:采用反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶液的含量。方法:色谱柱为phenomenexC8（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈0.25%庚烷磺酸钠溶液（29∶71）用磷酸调pH值至3.2；检测波长为210nm；流速为1.0mL/min；进样量20μL。结果:异丙托溴铵在12.8～256μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9995，日间、日内RSD均小于1.5%。结论：本方法准确可靠

2、.freelL∶500μg）；庚烷磺酸钠为离子对色谱试剂，纯度≥99％，购自上海亿日化工科技有限公司；乙腈为色谱纯；其它试剂为分析纯。2含量测定2.1色谱条件参照文献［24］，选定试验条件为：C8色谱柱（phenomenexC85μm，4.6mm×250mm）；流动相为乙腈0.25%庚烷磺酸钠溶液（29∶71）用磷酸调pH至3.2；检测波长为210nm；流速为1.0mL/min；进样量20μL。2.2对照品贮备液的制备精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥24h的异丙托溴铵对照品12.80mg，精密称

3、定，置10.0mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1.28mg/mL的异丙托溴铵对照品液，备用。2.3供试品溶液的制备取本品15瓶，合并内容物，混匀，精密量取10mL，置50mL量瓶中，加0.001mol/L盐酸溶液甲醇（1∶1）稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.4系统适应性试验取溴化钾适量，用流动相溶液溶解制成溴化钾溶液。精密吸取溴化钾溶液、“2.2”、“2.3”项下溶液适量，分别按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。由图1可知，与异丙托溴铵对照品比较，供试品异

4、丙托溴铵色谱峰分离良好，符合高效液相色谱法的要求，且溴离子不影响本品含量测定。异丙托溴铵的出峰时间约在22min。2.5最低检测限和最低定量限取异丙托溴铵对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成供试液，按上述色谱条件取10μL进样。经试验，当进样浓度为0.3μg/mL时，信噪比为3∶1，即最低检测限为0.3μg/mL×10μL=3ng；当进样浓度为1.1μg/mL时，信噪比为10∶1，即最低检测限为1.1μg/mL×10μL=11ng。2.6线性范围考察取对照品储备液，分别精密吸取0.1、0.2、0.4

5、、0.8、2.0mL，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度依次为12.8、25.6、51.2、102.4、256μg/mL的系列标准溶液。照上述色谱条件，进样20μL，以样品浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：A=5900.864C+16415，r=0.9995，线性范围为12.8～256μg/mL。2.7精密度试验分别取12.8、51.2、2560μg/mL三种浓度的对照品溶液，于1d内分别进样5次及5d内分别进样5次，分别计算日内、日间RSD。结果见表1。表

6、1精密度试验结果（略）2.8样品溶液稳定性试验取批号为638066的样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在12h内每隔3h进样测定1次，测得RSD为1.30%，表明在12h内样品溶液稳定性较好。2.9重复性试验取批号为638066的样品，按“2.3”项下方法平行制备5份供试品溶液，分别进样，测得RSD为1.03%，表明该法重复性较好。2.10回收率试验取异丙托溴铵对照品约16mg、20mg和24mg各三份，精密称定，按处方比例加入空白辅料适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定含量，计算回收率，结果见

7、表2。表2回收率试验结果（略）2.11样品含量测定取批号为638066样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，样品含量测定结果为98.8%。3讨论异丙托溴铵为溴化季铵盐，在溶液状态下，其溴以离子形式存在［3］，在210nm处有一定紫外吸收。为验证该测定方法溴离子的存在不影响异丙托溴铵的含量测定，故选定溴化钾进行了试验。试验表明，采用该测定方法，溴离子不干扰异丙托溴铵的含量测定。流动相采用等度洗脱系统，用二极管阵列检测器测定异丙托溴铵对照品的峰纯度大于99.8%，表明主峰为单一峰，在210～40

8、0nm波长扫描，未漏检杂质峰。异丙托溴铵浓度在12.8～256.0μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。本方法灵敏度高，方法准确，重复性好，且操作简单，可用于吸入用异丙托溴铵溶液的质量控制。【