反相高效液相色谱测定动物源食品中大观霉素残留

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1、反相高效液相色谱测定动物源食品中大观霉素残留作者：苑丽胡功政肖传斌梁军李奎司红彬【摘要】目的建立反相高效液相色谱法配合电化学检测器测定动物源食品中大观霉素残留。方法用三氯乙酸匀浆抽提以脱去试样中的蛋白，然后用二氯甲烷去除试样中的脂溶性物质，再经LCSCX阳离子固相萃取小柱净化处理，产物进行检测。流动相为离子对缓冲体系(0.02mol/L柠檬酸∶0.004mol/L庚烷磺酸钠，50%NaOH调pH至6.10)∶乙腈(体积比为92.5∶7.5)，流速0.6ml/min，工作电极电压1.0V，柱温35

2、℃，检测波长254nm。结果大观霉素在0.01～10.0μg/ml范围内线性关系良好，相关系数R=0.99998。结论该法简便、直接、准确。【关键词】反相高效液相色谱电化学检测器大观霉素残留DeterminationofspectinomycinresiduesinanimalfoodbyRPHPLCABSTRACTObjectiveAreversedphasehighperformanceliquidchromatography(RPHPLC)methodicaldetectorinati

3、onofspectinomycinresiduesinanimalfood.MethodsThesamplesethane.Follon,thentheextractsined.Themobilephaseol/Lcitricacid∶0.004mol/Lsodiumheptanesulfonate,thepHadjustedto6.10by50%NaOH)∶acetonitrile(92.5∶7.5,V/V).Theflol/min,thentemperatureaintainedat35℃,a

4、ndthedetection.ResultsThelinearrelationshipofthepeakandconcentrationofspectinomycininedas0.01～10.0μg/ml,ethodissimple,direct,andaccurate.KEYillipore公司纯水系统自制)；带一个结晶水的柠檬酸、甲醇、氢氧化钠、氯化钠、三氯乙酸和二氯甲烷均为分析纯试剂。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：C18柱(瑞典AKZONOBELKromasiC18，250mm×4.6

5、mm，5μm)；保护柱(LabALLianceTMC18)；流动相为柠檬酸离子对缓冲体系(0.2mol/L柠檬酸∶0.004mol/L庚烷磺酸钠，50%NaOH调pH至6.10)∶乙腈(体积比为92.5∶7.5)，流速为0.6ml/min，工作电极电压1.0V，柱温35℃，检测波长254nm，进样量20μl，分离结果见图1。2.2标准曲线的绘制准确称取大观霉素0.0298g，加水溶解并定容为100ml，配成浓度为200μg/ml的储备液(按有效量计)，置4℃冰箱中保存，一周内用完。临用前，取此储图

6、1大观霉素标准溶液的高效液相色谱图(20μg/ml)备液用纯水稀释成0.01、0.02、0.05、0.25、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0μg/ml浓度的大观霉素标准溶液，在“2.1”色谱条件下进样，经电化学检测器检测，按其所得峰面积与对应的标准液浓度作标准曲线，并计算回归方程为：A=0.75468+16.53266CR=0.999976表明大观霉素在0.01～10.0μg/ml范围内线性关系良好。2.3样品处理2.3.1抽提称取(15g±0.05g)试样，转至一个50ml的离心管中，加

7、入12ml超纯水，在1800r/min条件下用高速组织捣碎机捣1min，取粘稠液18g加50%三氯乙酸2ml和二氯甲烷10ml，在回旋式振荡器上高速振摇30min。然后在4℃3800RCF［RCF=0.0000118×R×N2，R为离心半径(cm)，N为转速(r/min)］条件下离心30min，取上清10ml，加二氯甲烷2ml，在回旋加速器上振荡混合20min，再在4℃12000RCF条件下离心30min，上清液即为药物的抽提液。2.3.2净化采用LCSCX阳离子固相萃取小柱净化。首先LCSC

8、X小柱用甲醛活化，再用纯水平衡后，将经“2.3.1”法制得的备用液过柱，起始2ml弃去，收集随后3ml，经水性滤膜(0.45μm)过滤，滤液供HPLC测定。对肌肉和脂肪内本药的残留测定，可取“2.3.1”法制得的抽提液直接过0.45μm水性滤膜即可。2.4试样中药物残留量计算经“2.3”方法处理过的组织待测试样在“2.1”色谱条件下进样，经电化学检测器检测，空白鸡脂肪组织、鸡肉组织、鸡肝脏组织和鸡肾脏组织HPLC杂质峰不干扰加药(加药量为最高残留限量)后试样的HPLC色谱图(图2)