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1、肝细胞癌组织芯片环氧合酶【摘要】目的分析环氧合酶-2(COX-2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及意义。方法应用改良的手工制备组织芯片方法制备含150例肝细胞癌、92例癌旁肝硬化、45例癌旁慢性肝炎以及37例肝内转移灶和13例正常肝组织的组织芯片,结合免疫组织化学染色和图像分析技术检测COX-2蛋白的相对表达量。结果COX-2蛋白在HCC表达显著低于癌旁肝硬化、癌旁慢性肝炎(P<0.01)，但高于正常肝组织(P<0.05),差别具有统计学意义。在HCC组织中,低分化HCC的COX-2表达量显著低于高分化的HCC,
2、差别有统计学意义(P<0.01)。COX-2蛋白的表达与性别、肿瘤大小、组织学类型、包膜侵犯及转移均无关(P>0.05)。结论COX-2在HCC的发生中发挥重要作用,并与HCC的分化程度密切相关,但与HCC进展及侵袭转移关系不大。【关键词】前列腺素内过氧化物合酶;肝肿瘤;癌,肝细胞;芯片分析技术;免疫组织化学;图像处理,计算机辅助ABSTRACT:ObjectiveTodetecttheexpressionofcyclooxygenase-2(COX-2)inhepatocellularcarcinoma(HC
3、C).MethodsTissuechipsodifiedmanualtools,ples,92cirrhoticliversadjacenttoHCCsamples,45chronichepatitisliversadjacenttoHCCsamples,13normallivertissuesamplesand37intrahepaticmetastasislesionsamples.TheexpressionofCOX-2inedbyimmunohistochemistryandsemi-quantitativeima
4、geanalysis.ResultsTheexpressionofCOX-2inHCCallivertissues(P<0.01).MorelooretheexpressionofCOX-2decreased.COX-2expressionorsize,histologicaltype,tumorinvasionandmetastasis(P>0.05).ConclusionCOX-2mightplayanimportantroleintheprocessofHCCtumorgenesisandthediffe
5、rentiationofHCC,butnotrelatedetastasis.KEYplus二步法试剂盒(福州迈新生物技术开发公司)。1.3方法1.3.1肝细胞癌组织芯片制备应用改良的手工制备组织芯片的方法制备含肝细胞癌、癌旁肝硬化、癌旁慢性肝炎以及肝内转移灶和正常肝组织的组织芯片［3］,其基本过程包括用特制的模具定位、打孔针在受体蜡块打孔、取样针在供体蜡块取样及按预先设计的顺序准确点样。以4μm连续切片,温水裱片,敷贴于经多聚赖氨酸处理的载玻片。取其中一张行HE染色供形态学观察。1.3.2免疫组织化学染色高压抗原修复,采
6、用ElivisionTMplus二步法,据试剂说明书操作,一抗COX-2工作浓度为1∶100,以PBS代替一抗作为阴性对照,DAB显色,苏木精对比染色。1.3.3结果判断COX-2蛋白定位于细胞胞质,阳性产物为棕黄色。1.3.4图像分析采用摄像生物显微镜(BH-2，日本Olympus公司)在400倍视野下对芯片上每个点的阳性区域拍照,每例标本取5个视野;应用彩色图像分析系统(Image-ProPlus5.0,美国MediaCyberics公司)以显微镜定标尺定标,光密度校正,在HIS颜色模式下选中阳性区域,挖除核染色,并转
7、换为灰度图,使背景填充白色,测定每个视野的积分光密度(integralopticaldenisity,IOD)值,传入excel表中,取平均值代表标本蛋白的相对量,以进行半定量分析;第1张图处理完毕将整个分析过程录制成宏程序,后续分析图像,按照宏程序自动分析完成。1.4统计学处理所得计量数据以x±s表示,采用SPSS11.5统计软件包对数据进行单因素方差及t检验分析,以P<0.05为差别具有统计学意义。2结果2.1COX-2在HCC等4种组织的定性表达COX-2蛋白阳性信号定位于细胞质,在高分化HCC中癌细胞为弥漫性
8、阳性,在低分化HCC及肝内转移灶中弱表达或不表达,在癌旁肝硬化、癌旁慢性肝炎组织中表现为局灶肝细胞阳性,在正常肝组织无表达或微弱表达(图1)。2.2COX-2在HCC等4种组织的半定量表达COX-2蛋白在HCC组、癌旁肝硬化(肝硬化组)、癌旁慢性肝炎(肝炎组)以及正常肝组织(正常组)相对表达量分别为(×
