重组腺病毒ad-hgf抑制博来霉素致大鼠肺纤维化的作用

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1、重组腺病毒Ad?HGF抑制博来霉素致大鼠肺纤维化的作用徐娟,哈小琴,唐瑜,昌业伟【摘要】目的:观察携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒(Ad?HGF)对博莱霉素（BLM）致大鼠肺纤维化的抑制作用，为基因防治肺纤维化探索有效途径.方法:BLM气管内滴注0.5mL（2mg）制作大鼠肺损伤模型60只,分为Ad?HGF治疗组（A组）、Ad?GFP治疗组（B组）和模型对照组（C组），各20只.造模次日A组给予1×109pfuAd?HGF，B组给予1×109pfuAd?GFP，C组给予0.5mL生理盐水灌注治疗；于14d处死动物,检测肺组织匀浆中羟脯氨酸含量；做石蜡切片，用1g/L苦味酸

2、天狼猩红染色，偏振光显微镜观察胶原及其类型，并对切片中I型胶原进行半定量评估.结果:Ad?HGF组羟脯氨酸含量(1.91±0.16)mg/g较Ad?GFP组(3.27±0.43)mg/g和模型对照组(3.04±0.26)mg/g低(P<0.05);肺组织切片中的I型胶原Ad?HGF组(2.12±0.61)明显较Ad?GFP组(3.17±0.56)和模型对照组(3.38±0.66)稀少(P<0.05).结论:重组腺病毒Ad?HGF对肺损伤后纤维化有抑制作用.【关键词】腺病毒;肝细胞生长因子;博莱霉素;肺纤维化　　【Abstract】AIM:Toexplorethe

3、effectofhumanhepatocytegroediatedHGFgene(Ad?HGF)onbleomycin(BLM)?inducedpulmonaryfibrosisinrats.METHODS:Sixty,A,BandCgroupsLnormalsaline,respectively.Allratsent.Collagencontentofthelungtissueinedbysemi?quantitativeestimationofItypecollagenfiberunderpolarizingmicroscopeAd?HGFtreatmentgroup［

4、(1.91±0.16)mg/g］entgroup［(3.27±0.43)mg/g］andmodelcontrolgroup［(3.04±0.26)mg/g,P<0.05］.ThesectionsstainedountoftypeIcollagenAd?GFPtreatment(3.17±0.56)andcontrolgroup(3.38±0.66);thereationofpulmonaryfibrosisinrats.　　【Keyycin;pulmonaryfibrosis　　0引言　　肺纤维化(pulmonaryfibrosis,PF)发病率逐年增高.对PF的治疗

5、仅限于非特异性抗炎、免疫抑制剂及糖皮质激素等，疗效尚不理想.肝细胞生长因子（hepatocytegroycin,BLM）大鼠PF模型因与人类的PF有相似的组织学特征而被广泛用于PF的研究［3］.为此我们采用BLMPF动物模型，观察重组腺病毒Ad?HGF对PF过程的影响，以期为PF的治疗寻找更有效的方法.　　1材料和方法　　1.1材料　　由天津太河制药有限公司提供,用时以生理盐水稀释为4g/L；携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒(Ad?HGF)和携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad?GFP)由军事医学科学院二所三室提供；1g/L苦味酸天狼猩红、30g/L戊巴比妥钠、40g/

6、L甲醛等试剂来自兰州军区兰州总医院实验中心.偏振光显微镜及照相系统(Olympus).　　1.2方法　　将,并继续向气管内推注空气0.5mL后，立即将大鼠直立，旋转，使药液在双肺内均匀分布并冲散到末端气体交换单位.大鼠造模后2d，随机分为3组：Ad?HGF治疗组、Ad?GFP治疗组和模型对照组.Ad?HGF和Ad?GFP治疗组分别滴入1×109pfu的Ad?HGF和Ad?GFP0.3mL,继续滴入生理盐水0.2mL，推入少量空气，将滴入的药物冲散到末端气体交换单位；模型对照组仅滴入生理盐水0.5mL，推入少量空气.给药后14d处死动物，取出肺组织.(责任编辑：admin)　

7、　1.2.1肺组织目的基因表达取Ad?GFP治疗组和模型对照组大鼠部分肺组织作常规冰冻切片，荧光显微镜下观察目的基因的局部表达.　　1.2.2肺组织羟脯氨酸含量测定取同一部位适量肺组织放入冰冷生理盐水中漂洗除去血液，滤纸拭干称其湿质量适度剪碎后匀浆，按Yang等［4］方法进行测定.　　1.2.3肺组织的胶原纤维染色将所取肺组织抽真空后用150g/L甲醛固定，1，常规脱蜡至水，蒸馏水洗2min，苦味酸染色液浸染60min，无水乙醇迅速脱水2次，用滤纸吸去切片水，二甲苯透明和中性树胶封固.偏振光显微镜观察胶原及其类型.