大鼠嗅球发育过程中的凋亡与增殖论文

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1、大鼠嗅球发育过程中的凋亡与增殖论文陈福权，王锦玲，邱建华，刘顺利，米文娟【关键词】增殖细胞核抗原【Abstract】AIM:Toinvestigatethechangingpatternofapoptosisandproliferationinthedevelopmentofratolfactorybulb.METHODS:Olfactorybulbsembryonicday14,postnatalday1(P1),20(P20)andadultratsandaldehyde,follobeddingandserialse

2、ctioning.Eachgroupconsistedof10rats.Apoptosisandproliferationinedmunofluorescencestaining.RESULTS:Apoptosiscellsmunoreactivecellsainlyaroundtheependymallayerinembryonicday14andP1ratolfactorybulb,andapoptosisandPAimmunoreactivecellsmainlydistributedinglomerularlaye

3、randgranulelayerinP20andadultratolfactorybulb.ApoptosisandPAimmunoreactivecellsreducedsignificantlyastheratsbecamemature.CONCLUSION:Apoptosisandproliferationintheratolfactorybulbreducesgraduallyfromembryotoadult.【Keyo内凋亡，存活的细胞最终分化为小球周围中间神经元［2］.阻止嗅觉刺激可使颗粒细胞层中间神经元的神

4、经发生和细胞凋亡减少［1］，而增加气味刺激可以促进神经发生［3］.由于嗅上皮的嗅感觉神经细胞凋亡在胚胎13d时达高峰［4］，而嗅上皮中嗅感觉神经细胞的发育与嗅球的神经发生有密切的联系，推测胚胎大鼠嗅球也可能存在活跃的细胞凋亡，因此我们采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)和增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PA)免疫荧光染色法检

5、测大鼠从胚胎到成体嗅球细胞凋亡与增殖的变化，以探讨其变化规律.1材料和方法1.1材料40只二级SD大鼠(第四军医大学实验动物中心提供)分4组：孕14d(embryonicday，E14)大鼠被颈椎脱位处死后，打开腹腔，取出10个胚胎，显微镜下取双侧嗅球，新生第1日(postnatalday,P1)和P20大鼠各10只，颈椎脱位处死后取双侧嗅球，40g/L多聚甲醛4℃固定24h；雌性大鼠(6mo,200~250g)10只，速眠新注射液(长春农牧大学兽医研究所，0.8mL/kg,sc)麻醉，40g/L多聚甲醛经心脏灌注，取双侧

6、嗅球,40g/L多聚甲醛4℃固定12h.标本石蜡包埋，连续切片，厚度3μm.TUNEL检测试剂盒，PA小鼠mAb和FITC羊抗小鼠IgG购自博士德生物有限公司.1.2方法1.2.1TUNEL检测切片脱蜡至水，0.1mol/LTBS漂洗后，新鲜配制30mL/LH2O2室温处理10min；蛋白酶K（1∶100）室温消化5min；标本加标记缓冲液室温10min后甩掉，TdT和DIGdUTP（1∶1）加入标记缓冲液混合，37℃标记2h；封闭液室温20min；生物素化抗地高辛抗体（1∶100）37℃孵育1h，加SABC37℃反应30

7、min，DAB显色.阴性对照省去TdT.每步骤间以0.1mol/LTBS漂洗.切片脱水，透明，封片.1.2.2免疫组织化学染色切片脱蜡至水，30mL/LH2O2室温30min；微波抗原修复；正常山羊血清封闭20min，甩去，不洗；PA小鼠mAb（1∶100）4℃过夜；FITC羊抗小鼠IgG37℃标记1h.以上步骤后均以0.1mol/LPBS漂洗3次.切片自然干燥，缓冲甘油（80%甘油，20%0.1mol/LPBS）封片.荧光显微镜（Olympus）观察.阴性对照以PBS代替一抗.每只动物随机选择5~10个高倍视野，记数10

8、00个神经细胞中的阳性细胞，阳性细胞数和所有计数细胞数的比率为凋亡指数和PA增殖指数.统计学处理：数据以x±s表示，采用SPSS10.0统计软件处理，各组间平均数比较采用非参数秩和检验.P0.05为具有统计学意义.2结果所有染色背景清晰，阴性对照不着色，TUNEL检测阳性产物呈棕红色，PA阳性染色呈绿色