鼻咽癌患者外周血t淋巴细胞亚群和nk细胞检测论文

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1、鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞检测论文【摘要】［目的］探讨鼻咽癌患者T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+）和自然杀伤（NK）细胞百分含量的变化及其意义。［方法］应用流式细胞仪（FCM）检测109例鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞的水平，其中未放疗者38例，放疗者71例，检测时未发生复发或远处转移者67例，已有复发或远处转移者42例，并测定20例正常对照组作比较。［结果］鼻咽癌患者与正常对照组比较，外周血CD4+细胞水平（24.15±10.91）明显下降（P0.01）；CD8+细胞水平（39.77±15.66)明显上升（P0.01）；C

2、D4+/CD8+（0.75±0.54）严重倒置（P0.01）；CD3+细胞水平（61.55±15.96）无变化；NK细胞水平（18.20±13.04）升高（P0.05）；放疗后除CD8+细胞水平上升（P0.05），其它指标均无变化；复发或转移组除NK细胞水平上升（P0.05）.freelanCoulter公司EpicsMCL?鄄XL流式细胞仪，Coulter公司Q?鄄PREP溶血仪，BeckmanCoulter公司IgG?鄄PE/IgG?鄄FITC双色标记单克隆抗体同型对照，CD3?鄄FITC/CD16，CD56?鄄PE双色标记单克隆抗体，CD4?鄄FITC/CD

3、8?鄄PE双色标记单克隆抗体。1.3实验方法取100μl外周抗凝血（EDTA抗凝），分别置于3个流式细胞反应管中，加入20μl双色标记单克隆抗体。其中加入20μlIgG?鄄PE/IgG?鄄FITC的反应管作为同型对照，加入CD4?鄄FITC/CD8?鄄PE的反应管检测CD4+/CD8+，加入CD3?鄄FITC/CD16，CD56?鄄PE的反应管检测CD3/CD16+CD56+。混匀后，避光孵育15～20min。用Q?鄄PREP溶血仪溶血，溶血完成后，3000r/min离心5min，弃上清，加入500μlPBS混匀沉淀的白细胞，上机检测。以FS和SS设门，取淋巴细胞

4、进行检测。先用IgG?鄄PE/IgG?鄄FITC调节荧光，然后分别读出CD4?鄄FITC/CD8?鄄PE，CD3?鄄FITC/CD16，CD56?鄄PE检测值。1.4统计学处理实验数据采用t检验统计分析。2结果2．1鼻咽癌组与正常对照组比较与正常对照组比较，鼻咽癌患者外周血CD4+细胞水平（24.15±10.91）显著下降（P0.01）；CD8+细胞水平（39.77±15.66）显著上升（P0.01）；CD4+/CD8+（0.75±0.54）严重倒置（P0.01）；CD3+细胞水平（61.55±15.96）无变化；NK细胞水平（18.20±13.04）升高（P0.

5、05），见表1。2.2未放疗组与放疗组比较放疗组较未放疗组CD8+细胞水平出现上升（P0.05）；CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK水平在两组间均无统计学差异,见表2。2.3未发生复发或远处转移组与发生复发或远处转移组比较未发生复发或转移组较出现复发或转移组NK细胞水平出现上升（P0.05）；CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+在两组间均无统计学差异，见表3。3讨论本研究结果表明，鼻咽癌患者有免疫状态异常。鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚群存在显著特点：CD4+/CD8+严重倒置，CD4+细胞水平下降，CD8+细胞水平升高。这种异常免疫状态跟鼻咽

6、癌患者存在细胞免疫异常反应有关，可能关系EB病毒感染后的免疫反应。一般地，CD3+细胞代表成熟T淋巴细胞，是细胞免疫中主要的活性细胞。它按CD表型分为CD4+和CD8+两大亚群。CD4+细胞又称辅助T细胞，能协助B细胞分泌抗体和调节其它T细胞群的免疫应答。CD8+细胞常表现细胞毒活性，是主要的细胞毒效应细胞。在T淋巴细胞网络中，CD4+和CD8+细胞处于调节枢纽地位，其数量和比值变化反映免疫功能状态3，4。NK细胞表型为CD16+或CD56+，是非特异性细胞毒细胞，可以杀伤丢失MHCⅠ类分子的肿瘤细胞和病毒感染细胞，弥补CD8+细胞的不足3。在本研究中，与正常对照

7、组比较鼻咽癌患者外周血总T淋巴细胞即CD3+细胞无变化，CD4+细胞下降（P0.01），CD8+细胞上升（P0.01），CD4+/CD8+严重倒置（P0.01），NK细胞上升（P0.05）。细胞毒细胞（CD8+和NK）呈过度增殖，而辅助调节细胞（CD4+）呈抑制状态，造成CD4+/CD8+严重倒置，证实鼻咽癌患者存在免疫状态异常。未放疗组与放疗组比较，除CD8+细胞水平上升（P0.05），其它指标均无变化。检测时未发生复发或远处转移组与已有复发或远处转移组比较，除NK细胞水平上升（P0.05），其它指标均无变化。值得注意的是CD4+/CD8+严重倒置（P0.01）

8、的状态始终