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1、益肾通肺汤对实验性慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织MMP.freelentofYishentongfeidecoctioninCOPDbymeasuringtheexpressionofMMP-9andTIMP-1inlungtissue.Methods36maleMP-9andTIMP-1inlungtissueeasuredbymeansofimmunohistochemistry(SP).LungtissuesectionstainedbyHEorphologicalalternations.ResultTheexpressionofMMP-9andTIMP-1inlun
2、gtissueofthemodelratssignificantlyincreasedparedalrats(P0.01),anddecreasedrelativelyparedentrats(P0.01).ConclusionYishentongfeidecoctioncanreducetheexpressionofMMP-9andTIMP-1inlungtissueofratmodelofCOPD,andhaseffectonthepreventionandtreatmentofCOPD.Keya公司。2实验方法2.1分组大鼠随机分为3组。对照组(A组,12只)：正常
3、饲养,灌服等量生理盐水。益肾通肺汤治疗组(C组,12只)：在制备COPD模型的同时,于每天熏香烟前按24g/(kg?d)灌服1g/mL的益肾通肺汤煎液。模型组(B组,12只)：分别于第1、14天气管内注入LPS(200μg/200μL)；第2～30天(第14天除外)兰州牌过滤嘴香烟(焦油烟量15mg,烟气烟碱量1.0mg)烟雾；每日上下午分别将大鼠置于72L的密闭玻璃箱内,将香烟插在50mL注射针头上,点燃经玻璃箱顶盖的通气孔伸入玻璃箱,先缓慢抽吸烟雾于空针内,再将烟雾推入玻璃箱内,如此反复,使玻璃箱内烟雾浓度达5%左右,30min后将大鼠移出玻璃箱,每日熏2次。30d后
4、进行以下实验。2.2动物处理先将动物称重,腹腔内注入2%戊巴比妥钠(25mg/kg)麻醉,将大鼠仰卧位固定,沿正中线剪开皮肤和腹壁肌肉,剪断两侧肋骨和胸肌,暴露胸腔,从喉头以上剪断气管,将胸腔脏器摘除,一并取出心脏,分离出肺脏。用生理盐水10mL分3次行左肺支气管肺泡灌洗,总回收率为50%～80%,灌洗液(BALF)行白细胞计数及分类；于右下肺矢状面最大周径处横贯取材,10%中性甲醛固定,24ｈ内石蜡包埋、切片。2.3MMP-9和TIMP-1的检测采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法(武汉博士德公司,SP即用型试剂盒)在石蜡切片上测MMP-9和TIMP-1的免疫组化表达,一
5、抗为1∶100MMP-9和TIMP-1多克隆抗体,二抗为生物素山羊抗兔IgG,阴性对照标本除以PBS代替一抗外,其它步骤与被测标本相同,阳性反应为胞浆中出现棕黄色颗粒。2.4统计学方法全部数据用SPSS13.0统计软件处理,计量资料采用x±s表示,组间采用T检验,计数资料行χ2检验。3结果3.1灌洗液白细胞计数及分类(见表1)表13组BALF中白细胞计数及分类比较(略)3.2支气管肺组织MMP-9、TIMP-1免疫组化结果(见表2)表2MMP-9、TIMP-1免疫组化表达分析(略)注：与A组比较,#P0.01；与B组比较,△P0.01；免疫组化表达分析实验过程空白组、模型
6、组各死亡大鼠1只。3.3慢性阻塞性肺疾病模型组病理学改变模型组支气管肺组织病理表现基本符合人类慢性支气管炎及阻塞性肺气肿的特点。光镜下见支气管纤毛柱状上皮细胞部分脱落,杯状细胞增生,支气管黏膜下肌层增生、肥厚,黏膜层、黏膜下层及肌层大量炎性细胞浸润；细支气管壁周围可见较多炎性细胞浸润,肺泡壁变薄、胀大、破裂或形成大泡,弹力网破坏。4讨论吸入有害物质引起肺与气道的持续炎症病变是引起COPD的关键。本实验采用两次气管内注入适量LPS和反复烟熏的方法制作COPD大鼠模型。结果表明,模型组支气管肺组织病理形态学基本符合人类慢性支气管炎及阻塞性肺气肿的特点。而且,模型组MMP-9和
7、TIMP-1的表达与空白组相比明显增强(P0.01),说明此法可用于COPD气道重塑的研究。MMP是降解气道各种细胞外基质的主要酶类,MMP-9(明胶酶B)主要降解弹力纤维及明胶Ⅳ、Ⅴ型胶原。本研究显示,模型组大鼠支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、支气管肺组织微小血管内皮细胞MMP-9表达显著增强。提示MMP增多可破坏肺泡基质成分使肺泡腔扩大,肺泡弹性回缩能力减弱,从而导致气体滞流1。另一方面,通过介导炎症细胞聚集和破坏上皮/内皮结构,参与炎症反应和组织重建,炎症细胞在气道腔及气道壁中聚集,加重了局部的炎症反应,导致气流阻塞。因此
