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1、高效液相色谱法测定荜茇止痛酊中胡椒碱的含量论文.freelL/min,柱温为室温,检测波长为343nm,进样10μL,以外标法计算含量。结果胡椒碱在8.3～41.5mg/L内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为：A＝3413186ρ－7467.7,r＝0.9998；其平均回收率为99.7%,RSD＝1.8%(n＝6)。结论该方法简便,重复性好,空白无干扰,.freelethodofcontentdeterminationofPiperineinBibaZhitongTincture.MethodsHPLCiningthecontentofpiperineinBiba
2、ZhitongTincture.C18chromatographiccolumnntemperaturebeingtheroomtemperature.Themobilephaseethanol-L/min.Thedetection,andthesamplingvolumeethodg/L)shoassconcentrationofcontrolgroup.Itsregressionequationethodissimple,convenient,goodreproducibilityandnon-interference,andcaneffectivelycontroltheq
3、ualityofthepreparation.Keym×250mm,10μm),大连依科特科学仪器有限公司；流动相：四氢呋喃-甲醇-水(V∶V∶V＝30∶30∶50)；流速：1.0mL/min；检测波长：343nm；柱温：室温；分离度：R1.5；理论板数按胡椒碱峰计算应大于1500。2.2检测波长的选择对胡椒碱的乙醇溶液进行紫外区扫描,结果胡椒碱在343nm处有最大吸收,故选用343nm作为检测波长。2.3流动相的选择曾试验4种流动相：①甲醇-水(77∶23)；②乙腈-水(70∶30)；③乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(70∶30),用磷酸调节pH为3.5、3.1；④四氢
4、呋喃-甲醇-水(30∶30∶50),其中④使胡椒碱峰与杂质峰分离效果好,能基线分离。2.4溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱对照品10mg,置50mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀。精密量取5mL,置50mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1mL中含胡椒碱20μg)。供试品溶液的制备：精密量取荜茇止痛酊1mL,置25mL棕色量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,于冰箱中冷藏1.5h,取出,放置至室温,滤过,取续滤液5mL,置25mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。阴性对照液的制备：按处方中药味的比例自配不含荜茇的群药,按其工艺制成阴性制剂,再按供试
5、品溶液制备方法制成空白溶液,即得。2.5阴性液干扰试验精密吸取供试品溶液、阴性液和对照品溶液各10μL注入色谱仪中,由色谱图可知,在与对照品色谱峰保留时间相应的位置上,供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰出现；而阴性液在此峰位无吸收,对本品中胡椒碱的含量测定无干扰,色谱图见图1。2.6线性关系的考察精密吸取胡椒碱对照品(10.38mg→50mL)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,分别置25mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取10μL,注入高效液相色谱仪,记录峰面积。以对照品的含量对峰面积值作图,得到一个通过原点的直线,并绘制标准曲线。结果表明,胡椒碱在8.
6、3～41.5mg/L范围内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为：A＝3413186ρ－7467.7,r＝0.9998。2.7精密度试验精密吸取同一供试品溶液(批号041212),重复进样5次,求得RSD＝0.93%。2.8稳定性试验精密吸取同一供试品溶液(批号041212),分别于配制后0、2、4、8、16、24h测定色谱峰面积,计算RSD为1.2%,结果表明,其在24h内基本稳定。2.9回收率试验精密吸取已知含量的同一批号(批号041212)样品0.5mL,分别精密加入胡椒碱对照品乙醇溶液,依法测定,结果平均回收率为99.97%,RSD＝1.8%(n＝6)。见表1
7、。表1加样回收率试验结果（略）2.10样品中胡椒碱含量测定取3批荜茇止痛酊样品,照“2.4”项测定,结果见表2。表2样品含量测定结果(略)3讨论本实验采用高效液相色谱法内标法和外标法2种方法进行荜茇药材中胡椒碱含量的对比试验,结果显示,2种方法测定结果基本相同。2005年版《中华人民共和国药典》采用内标法测定含量,结果准确,但鉴于中药复方制剂成分复杂,采用内标法时分离度难以满足要求,因此,本实验研究采用外标法更为实际、可行。由于荜茇止痛酊所含成分复杂,给含量测定带来一定的困难。我
