紫杉醇长效注射缓释微球的体内外评价

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1、紫杉醇长效注射缓释微球的体内外评价【摘要】目的:制备以PLGA为载体材料的紫杉醇长效注射缓释微球，并对其体内外释药规律、抑瘤效果等进行评价。方法:使用改良的单乳溶剂蒸发法制备紫杉醇长效缓释微球，通过分析粒径分布、包封率、体外释放效果、白细胞水平及体内抑瘤效果等指标，对其进行评价。结果:所得微球平均粒径小于10μm，包封率大于80%，体外能持续释放30d。对裸鼠体内的前列腺PC-3M肿瘤的抑制率为60.35%。结论:以PLGA为载体材料制备的紫杉醇长效缓释微球提高了紫杉醇的溶解性，延长了药物的释放时间，并在体内长时间有效抑制肿瘤的

2、生长速度，具有较好的抑瘤效果和较低的血液毒性。【关键词】紫杉醇;微球;抑瘤实验;血液毒性　　紫杉醇是一种从太平洋红豆杉树树皮中提取的有效抗肿瘤药［1-2］。本文研究的目的是制备一种以生物可降解聚合物PLGA［poly（D，L-lactic-co-glycolicacid）］为材料的紫杉醇微球，这种微球体外释放长达30d，体内注射28d后，未表现出明显的血液毒性。治疗荷PC-3M肿瘤裸鼠20d可以有效抑制肿瘤细胞生长，抑瘤率为60.35%。　　1材料与方法　　1.1材料紫杉醇购自重庆美联制药有限公司;PLGA（75.25，50.5

3、0，M.）和乙腈均购自于北京化学试剂公司。　　1.2紫杉醇微球的处方筛选采用改良的单乳溶剂蒸发法制备紫杉醇微球。适量紫杉醇和PLGA溶解于DCM中，此溶液保存于4℃以防止DCM的挥发。将此溶液逐滴加入至20ml高浓度的PVA溶液中，高速搅拌1min。之后将外水相稀释至2%（in的速度持续搅拌2h，挥发掉DCM。然后将该溶液冷冻离心10min，弃去上清液，蒸馏水反复洗涤沉淀，最后冷冻干燥。　　1.3微球的物理性质粒径的测定:用激光粒度分析仪（OMECLs800，中国珠海欧美克公司）测量粒子大小。微球电镜扫描:获得的微球通过电镜（J

4、E-OL，JSM-5600LV）扫描得到其外部形状和表面特征。　　微球中紫杉醇含量的测定:用HPLC分析测定PLGA微球中包含的紫杉醇含量。取3mg紫杉醇微球溶解于1ml的DCM，之后再加入5ml的乙腈:水（50:50，v.v）的溶液，并涡旋振荡混匀。通入氮气挥去DCM之后，用HPLC分析。　　1.4体外药物释放实验将适量载药微球混悬于10ml的磷酸盐缓冲液（PBS，PH7.4）中，其中还含有吐温80、吐温20和叠氮钠。将装有该混悬液的瓶子置于恒温37℃水平振摇，振摇幅度6cm，速度100r.min。在指定的时间点，将每批微球的

5、3个样品取样，冷冻离心分离。将得到的微球重新用10ml新的介质混悬后，继续振摇。离心所得上清液，用上面描述的HPLC方法测定释放的药量。　　1.5微球的血液毒性评价　　1.5.1实验动物18～20g雄性昆明鼠，购自军事医学科学院实验动物中心。定时投食，自由饮水。　　1.5.2给药方式及分组每组6只小鼠，每组平均体重相差不超过1g。治疗组中分为载药微球组和市售紫杉醇注射液（Taxol）给药组，对照组为生理盐水注射组。微球组皮下注射，Taxol组和生理盐水组静脉给药。给药剂量参考Taxol的临床给药剂量，3组均为175mg.ml。　

6、　1.5.3白细胞的测定于给药前、给药后7、14、21、28d，分别将每只小鼠割尾静脉取血20μl，用SysmexF-820半自动血细胞分析仪（日本东亚公司）测量每只动物的白细胞数。　　1.6紫杉醇缓释微球的体内抑瘤实验　　1.6.1实验动物及细胞4～6周龄雄性裸鼠，购自军事医学科学院实验动物中心;前列腺PC-3M肿瘤细胞，购自北京大学医学部病理研究所。　　1.6.2动物分组及给药方式、剂量每组7只裸鼠，每组平均体重相差不超过1g。治疗组中分为载药微球组和市售紫杉醇注射液（Taxol）给药组，对照组分为生理盐水注射组。微球组和生

7、理盐水注射组均在瘤旁注射，Taxol组分别静脉注射和瘤旁注射。给药剂量参考Taxol的临床给药剂量，3组均为175mg.ml。　　1.6.3抑瘤率测定待治疗10d后处死裸鼠，完整剥离皮下肿瘤移植物，称重，并按照下列公式计算抑瘤率。瘤重抑制率%=（1-T.C）x100%，（C为对照组平均瘤重，T为治疗组平均瘤重）。　　1.7统计学处理数据经SAS6.12统计软件进行组间t检验。　　2结果　　2.1紫杉醇微球的处方筛选　　2.1.1PLGA分子量对包封率的影响PLGA作为微球的主要骨架材料，其分子量直接影响到微球的包封率。PLGA分

8、子量越高，其黏度随之提高，包封率也升高。　　2.1.2乳酸.羟基乙酸（LA.GA）不同比例对包封率的影响相同分子量的PLGA由于其乳酸.羟基乙酸的比例不同而影响到微球的包封率。随着乳酸在PLGA中所占比例的增加，材料的疏水性增加，包封率升高。　　2.2优化工艺验