唑吡坦对大鼠下丘脑内睡眠相关基因表达的影响论文

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1、唑吡坦对大鼠下丘脑内睡眠相关基因表达的影响论文牟丽曾丽玲张小虎黄民赵华【摘要】目的研究催眠药唑吡坦对下丘脑内一些睡眠相关基因表达的影响。方法大鼠随机分为唑吡坦组和对照组(生理盐水灌胃)。采用RTPCR方法检测下丘脑内GABAA受体α1和α2、褪黑素1a受体、hypocretin及hypocretin受体2的mRNA表达水平。结果与对照组相比，唑吡坦降低下丘脑内hypocretin及褪黑素1a受体表达(P0.05)，增加hypocretin受体2表达(P0.05)，但对GABAA受体α1和α2表达则无明显影响(P0.05)。

2、结论唑吡坦在下丘脑可能是通过褪黑素和hypocretin途径发挥其催眠作用，而不是通过GABA途径。【关键词】GABA;Hypocretin;催眠药;下丘脑;褪黑素【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectofhypnoticzolpidemonthemRNAexpressionofsomesleeprelatedgenesinthehypothalamus.MethodsRatsorsaline(vehicle)intothestomachandthenlyintozolpidemandveh

3、iclegroups.ThemRNAlevelsofGABAAreceptorα1andα2，melatonin1areceptor，hypocretinandhypocretinreceptor2inthehypothalamusinedbyRTPCR.Resultsparedtothevehiclegroup，theexpressionofhypocretinandmelatonin1areceptortreatedgroup(P0.05forall).Ho(P0.05).ConclusionsThehypnotic

4、effectofzolpideminthehypothalamusmaybeperformedbythepathelatoninandhypocretin，notbyGABAintheprocess.【Keyus;Melatonin唑吡坦是非苯二氮卓类催眠药物，现今广泛被用于治疗暂时性及慢性失眠〔1〕。以往有研究表明唑吡坦在黑质和外侧隔核主要通过调节GABA并作用于GABAA受体α亚基的途径而发挥其催眠作用〔2〕。下丘脑也是体内重要的参与睡眠调节的脑区〔3〕。但是唑吡坦在下丘脑内是否也存在相似的机制却少有报道。褪黑素受体、h

5、ypocretin及其受体含量在下丘脑内极其丰富〔4〕。特别是近年来，关于唑吡坦与褪黑素联合应用共同参与睡眠的治疗〔5〕的报道也被一些学者提出。因此，本实验应用RTPCR的方法观察了口服给予唑吡坦对下丘脑内的GABAA受体α亚基表达的影响，同时也检测了该区褪黑素受体1a、hypocretin及hypocretin受体2表达的情况，为进一步揭示唑吡坦在脑内的催眠机制提供新的依据。1材料与方法1.1动物及分组雄性.6:30光照开始)，室温为22℃±2℃。15只大鼠(重约450～550g)随机分为唑吡坦组(n=8)和对照组(n=

6、7)。晨起6:00灌胃给予唑吡坦(5mg/kg)或生理盐水。1.2实验试剂Trizol试剂和所有引物(Invitrogen);10×PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶和dNTP(Amersham);MMLD逆转录酶和100bpDNA标记(Promega);琼脂糖(USB)。1.3标本采集给予唑吡坦后，当其在体内作用到达最大药效时，将大鼠置于密闭容器内通以CO2麻醉处死，迅速分离出下丘脑，投入液氮。后转入-80℃冰箱保存待RNA提取。1.4RTPCR采用Trizol法提取总RNA。经分光光度计测定RNA纯度良好后，RNA在MM

7、LD逆转录酶作用下合成cDNA。再以cDNA作为模板参与完成PCR反应。PCR扩增的条件为：94℃预变性10min;94℃变性30s;退火30s;72℃延伸30s;扩增数个循环后72℃延伸10min。PCR引物的设计依据GenBank中大鼠的相应序列。GABAAα1受体：正向：5′TGGGAGAGCGTGTAACTG3′，反向：5′TCCCTTGTCCACTCATAG3′，56℃29个循环，421bp。GABAAα2受体：正向：5′GTGGCAGTAGGAATGAAC3′，反向：5′CTGGGATAAGAACC

8、TGTG3′，55℃29个循环，515bp。褪黑素1a受体：正向：5′CTCGTGGTGGCTATTTAC3′，反向：5′AGTTTGGGTTTGCTGTCC3′，56℃29个循环，467bp。Hypocretin：正向：5′TGTTCCTGCCGTCTCTAC3′，反向：5