乏氧对人舌鳞癌tca8113细胞hif1α表达影响的研究论文

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1、乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF1α表达影响的研究论文王霞王培源孙善珍吴淑华曲迅张祥盛【摘要】目的初步研究乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF1α表达水平的影响。方法将处于对数生长期的Tca8113细胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合气体的乏氧培养箱内培养，分别在乏氧培养1/2、1、3、6、12和24h时取出。每个时间段均设常氧培养对照组（5%CO2、95%O2）。采用RTPCR技术检测不同培养条件下细胞HIF1αmRNA的表达情况。结果HIF1α的表达在乏氧12h明显升高并达最高峰，24

2、h时又下降至常氧水平。每个时间段乏氧组HIF1α的表达均高于其相应的常氧对照组。结论乏氧影响了人舌鳞癌Tca8113细胞HIF1α基因的表达水平，肿瘤细胞通过上调HIF1α基因的表达适应肿瘤乏氧的微环境，有利于肿瘤的发生与发展。【关键词】乏氧；缺氧诱导因子1α；Tca8113【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofhypoxiaonHIF1αexpressionintonguesquamouscancercelllineTca8113cells.Method

3、sTca8113cellsinlogarithmicgroRNARNAincreasedsignificantlyandreachedthepeackafter12hofhypoxia,andthendecreasedtothelevelofnormoxicconditionsat24h.TheexpressionofHIF1αmRNAinhypoxiaoxiccontrolgroups.ConclusionHypoxiaupregulatestheexpressionofHIF1αmRNA,akescan

4、cercellstoadopthypoxiainsolidtumor,andtopromotetumordevelopment.【KeyRNA水平的表达变化，观测乏氧对该基因的影响，为肿瘤的治疗寻找新的治疗靶点。1材料与方法1.1主要试剂、仪器与细胞RPMI1640(GIBCO)；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；Tca8113人舌鳞癌细胞系（中科院上海细胞库）；乏氧培养箱(HERAcell150,GERMAN)；RNA提取试剂盒（Trizol，上海生工）；RTPCR试剂盒（Takara产品）；DL

5、2000DNAMarker（Takara产品）；PCR仪(Eppendorf，德国)。1.2细胞培养人舌鳞癌细胞株Tca8113单层贴壁生长，细胞培养液由RPMI1640、10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml的链霉素构成。置于5%CO2的37℃培养箱内培养，待细胞进入对数生长期后，更换培养液为无血清培养基，而后进行乏氧培养，即把细胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合气体的乏氧培养箱内培养。分别在乏氧培养1/2、1、3、6、12和24h时取出。每个时间段均设常氧培养对照组（5%CO2、95%O

6、2）。1.3细胞总RNA的抽提（Trizol试剂盒）将在不同含氧状态下培养的细胞，去除培养液后加PBS温柔洗涤3次，加Trizol500μl，充分混匀，-20℃过夜。加入200μl氯仿，剧烈震荡混匀30s；12000r/min室温离心15min；小心转移上清至RNasefree1.5ml离心管里，加入等体积的异丙醇，室温离心；弃上清，加入无水乙醇洗涤两次，室温下使酒精完全挥发；沉淀用30～100μlDEPCH2O溶解。测定样品在260nm和280nm的吸收值进行RNA的纯度和浓度分析。1.4RTPCR检测按

7、照Takara逆转录试剂盒的说明，以总RNA为模板，以Oligo（dT）为引物合成cDNA第一条链，反应温度为45℃25min，99℃5min，5℃5min。HIF1α的引物序列：sense：5’GTCTCGAGATGCAGCCAGAT3’,antisense：5’TCACCAGCATCCAGAAGTTTC3’，片段长度为169bp（山东大学实验中心提供）。在同一试管中加入5×PCRBuffer10μl，TakaraExTaqTMHS0.25μl，Primer各0.5μl，灭菌三蒸水加至50μl，PCR

8、扩增条件为94℃20s，58℃20s，72℃1min，共34个循环，最后延伸72℃7min。实验中以双蒸水代替cDNA作阴性对照。1.51.2%琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物取RTPCR产物6μl和TakaraDL2000DNAMarker5μl电泳，紫外照相。捷达专业数码凝胶成像与分析系统3.3测定不同培养条件下HIF1α条带的光密度均值（OD）。2结果在不同培养条件下