高效液相色谱法测定大黄虫丸中芍药苷的含量论文

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1、高效液相色谱法测定大黄虫丸中芍药苷的含量论文【摘要】目的建立高效液相色谱法测定大黄虫丸中芍药苷含量的方法。方法采用HypersilODS2柱（4.6mm×250mm×5μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；柱温30℃；检测波长230nm。结果芍药苷线性范围0.12～1.08μg，平均回收率=98.78%，RSD=1.35%。结论该方法简便、可靠、准确，可用于该制剂中白芍的质量控制。【关键词】大黄虫丸芍药苷高效液相色谱法Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordetermi

2、nationofPaeoniflorininDahuangZhechongPill.MethodsAnHPLCmethodn（4.6mm×250mm×5μm）obilephaseandthecolumntemperatureethodisconvenient,.freelinationofthecontentofPaeoniflorininDahuangZhechongPill.Keym×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15:85）；柱温30℃；流速1.0ml/min；检测波长230nm；进样量10μl

3、。2.2对照品溶液的制备精密称芍药苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.6mg的溶液，作为对照品贮备液。2.3标准曲线的绘制分别精密吸取对照品贮备液0.2，0.6，1.0，1.4，1.8ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。各精密吸取10μl注入液相色谱仪中，测定，测得峰面积，以对照品进样量为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线，线性范围为0.12～1.08μg，回归方程Y=941.6X+6.2919，r=0.9999。2.4供试品溶液的制备取本品，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重

4、量，超声（功率250in，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，通过氧化铝-活性炭柱(中性氧化铝3g，湿法装柱，上覆层析用活性炭1g，甲醇预洗)，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，水浴浓缩至适量，转移至10ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜（0.45μm）滤过，作为供试品液。HPLC图谱见图1。2.5阴性实验按处方比例，制得缺白芍制剂，按供试品项下方法制备阴性样品，进行高效液相测定，证明阴性无干扰。2.6精密度实验取芍药苷对照品溶液（60.8μg/ml），重复进样5次，测得峰

5、面积分别为580.27545，580.94385，583.23654，582.19873，583.49573，RSD=0.24%,表明仪器精密度良好。2.7稳定性实验取供试品溶液（批号051104），每隔2h进样测定1次，共进样6次，测得芍药苷的峰面积值分别为345.85455，348.25948，351.16549，347.02654，349.98742，346.14215。RSD=0.62%，表明样品溶液在10h内测定稳定。2.8重复性实验取样品（批号051104）5份，按供试品制备项下分别提取，精制，测定，芍药苷含量分

6、别为1.8026，1.8374，1.8244，1.8149，1.7886(mg/g)，RSD=1.04%，表明实验重复性良好。2.9加样回收率实验取样品（批号051104）5份，分别加入芍药苷对照品适量，按样品制备项下方法制备。结果见表1。表1芍药苷加样回收率实验结果（略）2.10样品测定分别取3批样品，按供试品溶液制备项下制备供试品，分别进样，测定即得。测定结果见表2。表2不同批次样品中芍药苷的含量测定结果（略）《中国药典》2005年版Ⅰ部中白芍药材中芍药苷含量不得少于1.6%，推算得知大黄虫丸中芍药苷含量应不得少于1.4

7、4mg/g，因此以上3批样品含量均合格，二次开发制剂中芍药苷的含量应以此为依据。3讨论原方中药味较多，直接使用溶剂提取进行液相测定干扰较大，因此实验考察了供试品制备方法中提取溶剂（甲醇，稀乙醇）、提取方法（回流、超声）、提取时间（20，40，60min）、过柱（上样量、洗脱量）的条件，结果以正文所述方法最好，样品能够达到较好的分离。试比较了3种流动相［2］：①甲醇-水-冰醋酸（49∶50∶1）；②乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；③乙腈-水(13∶87)，结果以流动相②分离效果最好，故选择流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（

8、15∶85）。该含量测定方法简便，快速，重现性好，既可以为进一步开发大黄虫丸奠定基础，亦适合推广应用于含较多药味的中成药中白芍的检测。【