双齿围沙蚕浸膏生物活性的研究

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1、双齿围沙蚕浸膏生物活性的研究马睿霄，裴晨红，金枫清，佟长青，李伟（大连海洋大学食品科学与工程学院，辽宁大连116023）摘要：用70%乙醇对双齿围沙蚕进行热浸提后，得到双齿围沙蚕浸膏。然后对得到的浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯及正丁醇进行萃取，得到3部分萃取物。对双齿围沙蚕浸膏及各有机溶剂萃取部分进行抑菌试验和血管紧张肽I转化酶（ACE）抑制测试。结果表明，双齿围沙蚕浸膏及各有机溶剂萃取部分均具有抑制ACE作用，且具有剂量依赖性。双齿围沙蚕石油醚萃取部分对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌有抑菌活性，乙酸乙酯萃取部分对枯草芽孢杆菌、希瓦氏菌以及金黄色

2、葡萄球菌具有抑菌活性，正丁醇萃取部分对希瓦氏菌具有抑菌活性。.jyqkail：[email protected]；李伟，男，教授，E-mail:[email protected]DOI:10.3969/j.issn.1004-6755.2015.09.002双齿围沙蚕(Perinereisaibuhitensis)，又名沙虫、海虫、海蜈蚣等，分类学上属于环节动物门、多毛纲、沙蚕科、围沙蚕属[1]。双齿围沙蚕广泛分布于我国渤海、黄海、东海。南海沿海滩涂[2]。双齿围沙蚕具有很高的营养价值，含有丰富的粗脂肪、粗蛋白、不

3、饱和脂肪酸，人体必需的八种氨基酸以及多种矿物质和维生素，享有海中“冬虫夏草”的美称[3-4]。因为沙蚕养殖成本低，经济价值高，被广泛用于鱼、虾、蟹人工育苗和养殖。海洋无脊椎动物因其特殊的生活环境，代谢产物具有结构新颖独特、生物活性较强的特点。本研究中，制备双齿围沙蚕浸膏并对其抗菌活性及ACE酶抑制活性进行研究，旨在为双齿围沙蚕的开发利用提供基础数据。1材料和方法1.1材料双齿围沙蚕（Perinereisaibuhitensis）于2013年在辽宁省大连市长兴市场购买；抑菌试验菌种：大肠杆菌（Escherichiacoli）、枯草芽孢杆

4、菌（Bacillussubtilis）、产气杆菌（Aerobacteraerogenes）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、希瓦氏菌（Shea公司；甲醇，色谱纯；冰乙酸、三氟乙酸为国产分析纯。1.2方法1.2.1双齿围沙蚕浸膏的制备1354g新鲜双齿围沙蚕，匀浆粉碎后置于圆底烧瓶中，加入4倍体积（V/mol·L-1NaCl的0.2mol·L-1硼酸盐缓冲液(pH=8.3)，将Hip-His-Leu配成7.6mmol·L-1的溶液。ACE配置成60mu/L后冷冻保藏备用。将5μL样品加入到15μm/L的ACE

5、中37℃预热5min，之后加入25mLHHL，37℃下反应30min，后加入5μL10%的三氟乙酸终止反应，将反应液加入到高效液相中进行检测分析，定量测定马尿酸的峰面积。将得到的峰面积与空白试验的马尿酸峰面积进行比较。（空白试验只将样品换做蒸馏水，其他操作均相同）HPLC流动相为含有0.1%TFA和0.05%乙酸的30%的甲醇溶液。流速为1mL/min。1.2.3抑菌活性测试抑菌试验采用滤纸片法，结果以抑菌圈直径的大小来鉴定。固体培养基采用牛肉膏蛋白胨培养基，每1000mL培养基内分别加入NaCl5.0g、牛肉膏3.0g、蛋白胨10.

6、0g。并且以每200mL加入4g的比例加入琼脂粉，配制好以后将pH调至7.2～7.4之间。放入到高压灭菌锅内120℃灭菌20min，并趁热在无菌操作台中倒入平板培养皿中备用。液体培养基同固体培养基相比除不加琼脂粉以外，其他成分相同。将双齿围沙蚕石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取部分溶于生理盐水中，空白对照组则为生理盐水。阳性对照样品为青霉素。菌液的配制：分别将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、产气杆菌、希瓦氏菌，各自取一接菌环，放入到液体培养基中，放入后在摇床中37℃摇床培养2h。在无菌操作台中，将事先配置好的菌液每个吸取80μL均匀

7、涂布在培养皿中，并做3个平行对照，然后将滤纸片分别蘸取事先配制好的样品放置于涂布好菌液的平板培养皿中，放入培养箱中，36℃培养24h。2结果与讨论2.1双齿围沙蚕浸膏的ACE抑制活性双齿围沙蚕浸膏对ACE酶具有抑制作用。总浸膏以及正丁醇层浸膏表现出了随浓度增加而抑制率升高的规律，而石油醚和乙酸乙酯萃取部分没有明显的剂量依赖性。由图1可知，100mg/mL的沙蚕总浸膏提取物对ACE酶抑制率最高，高达84.07%。10mg/mL的石油醚层提取物抑制率最低，为44.72%。石油醚层萃取部分的抑制率最高体现在50mg/mL剂量组，抑制率为53

8、.26%。乙酸乙酯萃取部分的最高抑制率在20mg/mL，抑制率为62.72%。正丁醇萃取部分的最高抑制率在50mg/mL，抑制率为61.79%。ACE抑制剂不仅仅具有降低血压，扩张血管的作用，还能增加机体对胰岛素的敏感性