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1、高效液相色谱论文王光忠，李秋怡，张莲萍，刘焱文【关键词】柴胡；,,高效液相色谱摘要：目的制定柴胡药材中柴胡皂苷a、d的含量测定方法。方法用高效液相色谱蒸发光散射检测法（HPLCELSD）,AlltimaC18色谱柱,流动相甲醇水（80∶20）,速度0.8mlmin1；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度40℃，气压3.5bar。结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在1.908~19.08μg（r=0.9996）和1.804~18.04μg（r=0.9992）范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.35%（RSD=1.26%）和97.64
2、%（RSD=1.58%）。结论该方法简便、灵敏、可靠、准确、重现性好,可作为柴胡药材的质量控制方法。关键词：柴胡；高效液相色谱蒸发光散射检测法；柴胡皂苷DeterminationofSaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSDAbstract：ObjectiveTodeterminesaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD.MethodsHPLCELSDaC18chromatographycolumnandmethanolobilephase.Thefl
3、oobilephaselmin1.Thetubetemperatureofthedetectorethodiseasy,sensitive,.freelethodofRadixBupleuri.KeychinenseDC.或狭叶柴胡Bupleurumscorzonerifolium,杂质峰干扰十分严重,检测灵敏度低,影响了含量测定的准确性。本文应用HPLCELSD法同时测定柴胡皂苷a.freelchinenseDC.的根。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为AlltimaC18(250mm×4.6mm,5μm);流动相：甲醇水（8
4、0∶20）；速度0.8mlmin1，柱温25℃；检测器参数：漂移管温度40℃，气压3.5bar。在选定的条件下，柴胡皂苷a、d对照品与样品中其它组分色谱峰可基线分离，峰形好。按柴胡皂苷d峰计算，理论板数为3000以上。柴胡皂苷a，d对照品，供试品的高效液相色谱图见图1。1.柴胡皂苷a2.柴胡皂苷da供试品图谱b对照品图谱图1高效液相色谱图（略）2.2对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a9.54mg和柴胡皂苷d9.02mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。2.3供试品溶液的制备取柴胡药材粉末（过60目筛）约1g
5、，精密称定，置25ml量瓶中，加入5%氨水甲醇20ml，超声处理40min，放置至室温，加5%氨水甲醇至刻度，摇匀，静置，精密吸取上清液20ml置蒸发皿中，水浴蒸干，加甲醇溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.4线性关系考察分别精密吸取柴胡皂苷a和d的混合对照品溶液2，5，10，15，20μl注入高效液相色谱仪中，分别测定柴胡皂苷a和d的峰面积。以峰面积自然对数值为纵坐标，进样量的自然对数值为横坐标，绘制标准曲线。柴胡皂苷a在1.908~19.08μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y=5
6、.8972+1.5336X，r=0.9996；柴胡皂苷d在1.804~18.04μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y=5.8619+1.4965X，r=0.9992。2.5精密度实验精密吸取对照品溶液10μl，按上述色谱条件重复进样5次，测定峰面积，结果柴胡皂苷a和d的RSD分别为1.18%和1.53%，表明仪器的精密度良好。2.6稳定性实验取样品溶液,按含量测定方法及色谱条件分别置0，2，4，6,8h测定，结果柴胡皂苷a和d的RSD分别为1.29%和1.68%，表明样品溶液在8h内稳定。2.7重复性实验精密称取同批号样品6份
7、，按含量测定方法及色谱条件进行测定，结果样品中柴胡皂苷a和d的平均含量分别为11.4541，8.3612mgg1，RSD分别为1.34%和1.82%。2.8回收率实验采用加样回收法，，取已知柴胡皂苷a，d含量的样品6份，每份约0.5g，精密称定，分别加入柴胡皂苷a对照品6.0544mg和柴胡皂苷d对照品4.4621mg，按含量测定方法及色谱条件进行测定，结果柴胡皂苷a和d的平均回收率分别为98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。2.9样品测定取不同批号的药材，按上述供试液的制备方法制备供试液。精密
8、吸取对照品溶液5，20μl及供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，按外标两点法测定柴胡皂苷a，d含量，结果见表1。3讨论3.1柴胡皂苷a，d为柴胡的主要有效成分,但在提取过程中其结构易发生变化,因此，严格控制提取条件十分重要。本实验比较了甲醇、5%吡啶甲醇、5
