还原型谷胱甘肽对培养乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响

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1、还原型谷胱甘肽对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响作者：王进，王一彪，杨海英，赵丽丽，孔春妍【摘要】目的研究还原型谷胱甘肽对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的影响。方法建立心肌细胞A/R损伤模型，随机分为５组：A组，正常对照组；B组，单纯缺氧/复氧(A/R低氧2h，复氧1h)组；C、D、E组为还原型谷胱甘肽处理组，加入还原型谷胱甘肽(GSH)分别使其终浓度为40、80、160mg/L，后A/R。于复氧后测定各组培养液中乳酸脱氢酶(LDH)变化及细胞内丙二醛(MDA)含量和细胞存活率。结果与正常组相比，单纯低氧/复氧组LDH漏出量、MDA水平显著升高(P

2、<0.01)，细胞存活率显著降低(P<0.01)。与缺氧/复氧组比较，各谷胱甘肽处理组上述变化明显减轻(P<0.05)。结论还原型谷胱甘肽对乳鼠心肌细胞A/R损伤具有保护作用，并具有浓度依赖性。【关键词】还原型谷胱甘肽心肌细胞缺氧复氧Theeffectsofreducedglutathionesodiumonanoxia/reoxygenationinjuriesofneonatalratcardiomyocytes【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofreducedglutathionesodium(

3、GSH)onanoxia/reoxygenationinjuriesofneonatalratcardiomyocytes.MethodsA/Rmodelofmyocardialcellsofneonatalratslydividedintofivegroups:controlgroup(A):ent;A/Rgroup(B):2-houranoxiafolloediumtillthefinalconcentrationof40mg/LthenA/R;GSHconditionedgroup(D):addingGSHintoculturemediumtillth

4、efinalconcentrationof80mg/LthenA/R;GSHconditionedgroup(E):addingGSHintoculturemediumtillthefinalconcentrationof160mg/LthenA/R.Theactivityoflactatedehydrogenase(LDH)，thecontentsofcellularmelondadehyde(MDA)andtherateofcellviabilityofeachgroupyocytesinaconcentrationdependentmanner.【Ke

5、ycardiomyocytesanoxiareoxygenation1材料与方法1.1材料实验用1～3天的EM培养基由爱博公司出品；胎牛血清为美国　Gibco公司出品；胰酶为Sigma公司出品；丙二醛（MDA），乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒均购自南京建成生物研究所；还原型谷胱甘肽（古拉定）由LaboratorioFarmaceuticoC.T.S.R.1生产(批号：4027)。1.2乳鼠心肌细胞培养无菌取出生1～3天大鼠乳鼠心脏，剪碎后用0.25％胰酶消化4～5次，取除第1次以外的上清，用含15％胎牛血清的高糖DMEM中止消化，离心取心肌细胞沉淀，加入培养液，

6、集中混匀制成悬液，应用差速贴壁法分离纯化心肌细胞，以5×105/ml的培养密度接种于２４孔培养板中，在CO２培养箱中培养，48h后换液。1.3实验分组及操作程序试验分为５组，每组重复８孔，A组为正常对照组（培养板置培养箱中持续孵育3h结束实验）；B组为单纯缺氧／复氧组（A/R缺氧2h，复氧1h）：将培养板置于充有99.５％氮气的缺氧孵育器中37℃密闭培养2h，再以９5％氧气＋５％二氧化碳进行复氧1h；C组，D组，E组为古拉定处理组，加入古拉定使其终浓度分别为40、80、160mg/L。各组缺氧前、复氧前均给药。1.4实验检测指标(1)计数细胞搏动：在倒置显微

7、镜观察并计数心肌细胞搏动的频率及节律。(2)细胞存活率计数：采用台盼蓝排斥法检测，各组取少许细胞混悬液，0.4%台盼蓝混匀2min，按白细胞计数法在光镜下计数蓝染细胞。台盼蓝摄取率＝蓝染细胞／（蓝染细胞＋未蓝染细胞）×100%。(3)LDH及MDA活性及含量测定：实验结束后按试剂盒说明测定。1.5统计学方法数据以均数±标准差(x±s)2结果2.1古拉定对缺氧/复氧心肌细胞搏动的影响正常培养对照组心肌细胞搏动相对恒定，节律规则；A/R组心肌细胞搏动频率减慢，搏动幅度减弱，节律不齐，有部分停搏，与对照组相比，差异有非常显著性（P<0.01)；各古拉定处理组

8、明显逆转A/R损伤造成的搏动频率和节律异常，与A/R