赤眼蜂寄生与玉米螟胚胎发育的关系.doc

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1、赤眼蜂寄生与玉米螟胚胎发育的关系*利翠英以蓖麻蚕卵为寄主，对赤眼蜂的个体发育过程进行了研究。结果指出，如果赤眼蜂在寄主胚胎发育早期（即胚胎反转期之前）进行寄生，则正在发育的寄主胚胎停止发育，而赤眼蜂卵得到正常发育；[1]。笔者曾采用玉米螟赤眼蜂（Trichogrammaostriniae）早期寄生亚洲玉米螟（Ostriniafurnacalis）卵，并测定其卵内保幼激素酯酶（Juvenilehormoneesterase,JHE）活力的变化，证实玉米螟赤眼蜂对亚洲玉米螟卵的早期寄生属“抑性寄生”[2]。本研究为探讨赤眼蜂在不同时间寄生对

2、亚洲玉米螟卵胚胎发育的调控作用，笔者通过测定赤眼蜂不同时间寄生后，亚洲玉米螟卵内JHE活力变化，对比赤眼蜂不同时间寄生的寄生发生率以及寄生后赤眼蜂与寄主的发育情况，来阐明赤眼蜂的寄生特点。1材料与方法1.1材料玉米螟赤眼蜂（T.ostriniae）引自华南农业大学。用米蛾(CorcyracephaloniaStainton)卵繁殖。置于15L:9D、(25±1)℃、RH为80%左右的光照培养箱中饲养。试验中所用的赤眼蜂为一日龄雌蜂。亚洲玉米螟引自中国农科院植物保护研究所，参照周大荣等[3]的方法,在室内用人工饲料饲养。试验中所用的卵块为

3、产后当日的卵块。1.2试验方法1.2.1赤眼蜂不同时间寄生的寄生发生率以及寄生后赤眼蜂与寄主的发育情况：用硫酸纸收集新鲜的（产后12h内）、直径约0.5cm的亚洲玉米螟卵块，剪去周围多余的硫酸纸，将2块带卵的硫酸纸粘附于3cm×3cm九宫格纸的对角上制作成一张卵卡。引入羽化24h内经群体交尾后的玉米螟赤眼蜂雌蜂一头，并在管内放置浸过10%蜂蜜水的脱脂棉球，管口用外包纱布的脱脂棉球封口。然后将玻璃管放入温度（25±1）℃、RH50%～80%、15L:9D的光照恒温培养箱中，24h后除去雌蜂。每24h检查一次玉米螟或蜂的发育情况。赤眼蜂开始

4、羽化后，每12h观察一次，并将羽化蜂引出，最后解剖剩余玉米螟卵，统计寄生率。1.2.2待测样品的取样方法：取当日的卵块按产卵后24，48，60，72，84h大量接蜂。3h后去除赤眼蜂，接种后每隔12h取待测样品，直至96h后亚洲玉米螟卵孵化或144h左右赤眼蜂羽化，实验组分别取样9、8、7、6次；对照组（未寄生卵）同时取样,因96h后亚洲玉米螟卵已孵化，故从0至96h仅取样9次。所取样品卵与对照卵立即置于液氮罐中保存。1.2.3保幼激素酯酶活力测定：JHE活力测定采用放射化学法(RC)[4]。按每mL缓冲液60mg卵块的比例，用pH7.

5、0的0.1mol﹒L-1的磷酸缓冲液进行卵块的冰浴匀浆，超声波破碎5min后静置过夜，离心制备待测液。将待测液加入稀释后的3H.-JHI标样溶液中。经(29±1)℃温浴30min后用碱性甲醇溶液中止反应；涡旋振荡后加入异辛烷振荡萃取10min，4000r﹒min-1离心15min。吸取上清液和下层液各50µL置于闪烁瓶中，加入5mL亲水型闪烁液，由BeckmanLS—9800型液体闪烁计数器用H数法校准测定放射性活度（Bq）。所用试剂：3H-JHⅠ（10C）由美国杜邦原子能研究所合成（中国科学院动物研究所提供），放射性比活度为444.0

6、GBq﹒mmol-1，用异辛烷稀释后使用。异辛烷为国产分析纯试剂；磷酸缓冲液，碱性甲醇，亲水型闪烁液（PPO5g，POPOP0.5g，二甲苯665mL，TritonX-100335mL）。除TritonX-100为Amresco进口分装外，其余均由国产分析纯试剂配制。测定重复3次。1.3数据处理用Statistic6.0中的ANOVA进行数据统计分析，对于大于70%或小于30%的百分数，先进行反正弦转换，然后再进行统计分析。寄生发生率用U测验进行差异显著性检验。蜂羽化率（%）=赤眼蜂羽化卵数÷被寄生卵数×100%；寄生发生率（%）=发生

7、寄生蜂数÷供试蜂总数×100%2结果与分析2.1亚洲玉米螟卵的发育进度观察对亚洲玉米螟卵发育的观察发现，亚洲玉米螟卵在产下至12h时段其外表呈现乳白色；24h时变成淡黄色；72h时为深黄色，且部分卵内出现棕色点；到84h时卵内有棕-黑色点出现；96h时幼虫形态清晰可见，幼虫头部在卵壳内左右移动并开始孵化；完成发育的卵在120h内基本全部孵化。2.2赤眼蜂的寄生能力Table1.Percentsofwaspssuccessfullyparasitized(%)Hostage（h）Percentofwaspsthatsuccessfully

8、parasitized（%）TotalwaspsusedintestU-test0-1210030A12-2496.8832A24-3667.8628B48-6072.2236B60-727520B72-8