中药复方对2型糖尿病大鼠的胰腺中bcl

《中药复方对2型糖尿病大鼠的胰腺中bcl》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中药复方对2型糖尿病大鼠的胰腺中Bcl作者：杨宏莉，张宏馨，卢淑兰，李军，王燕，张伟伟，蒋雪【摘要】目的研究中药复方——本草消渴丹对糖尿病模型大鼠胰腺组织凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响，探讨复方中药治疗糖尿病的作用机理，为临床用药提供科学依据。方法将32只EGA公司产品。其他试剂均为市售产品。　　1.2仪器AR1530电子分析天平(1/1000，美国奥豪斯)；GT-1640京都血糖仪（SUPERGLUCOCARDⅡ）及试纸(由日本ARKRAY，Inct提供)；PCR仪，型号T1/T1+，德

2、国Biometra生产；SP-2102/756型紫外可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司生产；凝胶成像系统，BIO-RADpany生产。　　1.3高脂饲料的制备［3］基础饲料：碳水化合物占60%，蛋白质占22%，脂肪占10%(植物脂肪为主)，其它成分占8%。高脂、高糖饲料由基础饲料加炼猪油10%、蔗糖20%、猪油10%、胆固醇2.5%、胆酸钠1%，其中碳水化合物占50%，蛋白质占13%，脂肪占30%(动物脂肪为主)，其它成分占7%，由河北医科大学医学动物实验中心加工成饲料颗粒。　　1.4动物清洁级健

3、康雄性g/kg体质量(STZ溶于柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，所配浓度为10mg/ml)；对照组腹腔注射相应体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。构造模型组继续高糖、高脂饲料饲养4周后，禁食12h，按2g/kg体质量灌喂20%D-葡萄糖溶液，做口服葡萄糖耐量试验，凡0min和120min血糖分别≥7.8mmol/L或葡萄糖负荷后2h血糖≥11.0mmol/L的大鼠［4］为造模成功。　　选择造模成功的大鼠24只按体质量编号，参照随机数字表法分为3组，分别为模型组、二甲双胍组、本草消渴丹治疗组。各组均继续喂以高糖高脂

4、饲料4周，并每周称体质量。　　2.2治疗第7周后，各组动物分别灌胃相应药物或生理盐水，1次/d，给药按人与大鼠体表面积比折算成等效剂量。对照组、模型组分别每日灌胃等剂量的生理盐水；二甲双胍组每日灌胃二甲双胍70mg·kg-1，中药治疗组每日灌胃本草消渴丹1.25g·kg-1。　　2.3糖耐量实验实验期末空腹8h采尾静脉血后，以50%葡萄糖溶液灌胃，剂量为2.5g/kg，然后检测在0，0.5，1，2h后的血糖。由梯形累加法计算血糖曲线下区域面积（areaundercurve，AUC，mmol·h-1·

5、L-1）。　　2.4RT-PCR检测胰腺Bcl-2，Bax基因表达水平4周实验结束后，各组大鼠断颈处死，收集胰腺利用Trizol试剂提取总RNA，逆转录合成cDNA。根据NCBI中cDNA序列设计Bcl-2和Bax引物，引物由大连宝生物公司合成，以β-actinmRNA作为检测的内参照。根据试剂盒说明进行RT-PCR，反应总体系为50μl：10×OneStepRNAPCRBuffer5μl，MgCl2(25mmol/L)10μl，dNTPMixture(10mmol/L)5μl，RNaseinhib

6、itor(40U/μl)1μl，AMVRTaseXL(5U/μl)1μl，AMV-OptimizedTaq(5U/L)1μl，上游特异性引物(20μmol/L)1μl，下游特异性引物(20μmol/L)1μl，RNAsample(≤1μg)1μl，RNaseFreedH2O24μl。　　取10μl样品在2%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统扫描凝胶并进行定量分析，以β-actin为标准获得Bcl-2和Bax的相对表达水平。PCR反应引物序列产物及退火温度见表1。表1RT-PCR的引物序列、退火温度和产物长

7、度（略）　　2.5数据分析应用SPSS15.0的One-RNA表达水平（略）　　与正常组比较存在显著差别，*P<0.05，与模型组比较存在显著差别，＃P<0.05　　4讨论　　现代医学认为，胰岛β细胞的凋亡是糖尿病发病的重要机制［5］。凋亡受基因调控，其中最有效的调控物质是Bcl-2基因家族，它们在凋亡的基因调控中起着中心作用［6］。Bcl-2（Bcelllymphoma-Leukemia-2，B细胞淋巴瘤/白血病-2基因）是Bcl-2家族成员中主要的抗凋亡因子，在抵抗细胞凋亡及延长细胞

8、寿命方面的作用最具代表性，而Bax是凋亡促进基因。它们形成二聚体，调控蛋白酶和核酸酶活性，双向调节细胞凋亡。二者在细胞中的比例决定了细胞是否凋亡，当Bcl-2蛋白在细胞中过量表达时，与所有Bax结合，细胞存活，凋亡抑制；当Bax过量存在，与Bcl-2形成异源二聚体，则细胞凋亡［7～9］。　　中医理论认为，糖尿病的主要病证为本虚标实，阴虚热盛、气阴两虚、阴阳两虚三证分别代表糖尿病病程发展的早、中、晚3个不同时期，其中阴虚贯穿本病始终，气阴两虚为其基本证候，血瘀为主要兼证