反相高效液相色谱法测定清咽片中靛蓝的含量

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1、反相高效液相色谱法测定清咽片中靛蓝的含量作者：代春红，金向群*，孙明谦，肖锋，随志刚【关键词】清咽片；,,靛蓝；,,含量测定；,,高效液相色谱　　摘要：目的建立反相高效液相色谱法测定清咽片中靛蓝的含量。方法采用AichromBondAQC18色谱柱；甲醇水乙酸（64∶36∶0.5）为流动相，流速0.8ml・min-1，紫外检测波长为285nm。结果靛蓝可与其他主要成分分离，靛蓝与峰面积呈良好线性关系，线性范围在0.0294~0.588μg，回归方程为Y=26644.73X-1288.56，r=0.9999，样品平均回收率为99.51%，R

2、SD=0.72%（n=6）.结论该方法准确、快速、灵敏、重现性好。　　关键词：清咽片；靛蓝；含量测定；高效液相色谱　　AbstractObjectiveToestablishamethodusingRP-HPLCfordeterminationofthecontentofIndigoinQingyantablet.MethodsThecontentofIndigoNaturalisinedbyreversephaseHPLCat285nmonaAichromBond-AQC18column(4.6mm×250mm,5μm)ethanol-obileph

3、aseandflol・min-1.ResultsThelinearrangeofcalibrationcurveethodissimple,accurateandcanbeusedforthequalitystudyofQingyanTablet.　　Keyination;HPLC　　清咽片是由桔梗、硼砂、寒水石、青黛、冰片、薄荷脑、诃子（去核）、甘草、甘草霜等中药组成的复方制剂。具有清凉解热、生津止渴之功效，用于咽喉肿痛、声嘶音哑、口干舌燥、咽下不利的治疗。青黛为方中君药，靛蓝（Indigo）是其中主要成分，具有抗菌消毒、祛腐生肌之疗效

4、，是该药主要有效成分之一，因此选为测定指标。靛蓝含量测定方法有：紫外分光光度法［1］、直接比色法［2~4］、高效液相色谱法［5，6］等。由于本品为复方制剂，成分复杂，　　2.7稳定性实验分别精密吸取放置1，2，4，6，8，12h的供试品溶液，测定清咽片中靛蓝的峰面积，计算峰面积的RSD值为0.77%，表明供试品溶液至少在12h内稳定。　　2.8加样回收率实验精密称取靛蓝对照品适量，加入到已知靛蓝含量的清咽片（批号：20051001，靛蓝含量为0.0467%）中，按“2.2项”下方法操作，制备供试品溶液，测定清咽片中靛蓝的含量，结果靛蓝的平均回收率为99

5、.51%,RSD为0.72%,n=5。　　2.9清咽片中靛蓝的含量测定按“2.2项”下方法操作，制备供试品溶液，测定10批清咽片中靛蓝的含量。结果见表1。　　表1清咽片中靛蓝的含量测定结果(略)　　测定结果表明，清咽片中靛蓝含量基本稳定，故在平均含量的基础上，总含量上浮及下浮20%制定本制剂含量限度，限定每片含靛蓝的量不得低于0.11mg。　　3讨论　　3.12005年版《中国药典》采用紫外分光光度法测定靛蓝的含量，本实验采用高效液相法测定，操作简单，重现性好。通过全波长扫描得到靛蓝在285nm处有最大吸收，因此选择285nm为检测波长。　　3.2曾采

6、用甲醇超声1h，甲醇加热回流2h，氯仿超声1h，氯仿加热回流2h制备供试品溶液，结果发现，以甲醇为溶媒制备供试品溶液时，其它成分干扰较大，而且提取不完全；而以氯仿为提取溶媒时干扰成分少，提取完全，因此采用氯仿进行提取。在进行测定时发现，氯仿超声提取1h与氯仿加热回流2h，靛蓝的含量基本无差异，因此采用方便快捷的超声提取方法。　　3.3方法学考察表明：该含量测定方法操作简单，可行性强，重现性好。　　参考