一种提高组织dna抽提得率的方法

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1、一种提高组织DNA抽提得率的方法【摘要】目的采用常规酚-氯仿抽提法方法提取组织DNA，通过延长水浴时间提高提取DNA得率。方法各组设置不同的水浴时间，比较所提DNA得率。结果用酚-氯仿提取肝脏DNA，随着水浴时间的延长（2.5～7.5h），DNA提取得率由每100mg肝脏组织中得到341.4μg提高到701.9μg。结论该方法适用于用酚-氯仿对少量组织需提取较大量DNA的实验，为下一步的实验研究做准备。　　【关键词】酚-氯仿;DNA得率　　基因组DNA在分子生物学研究中应用广泛。酚-氯仿提取组织DNA的方法从上个世纪八十年代开始应用，以其操作简便，效

2、果好而一直方兴未艾。本实验旨在对酚-氯仿提取组织基因组DNA的过程加以改进，从少量组织中提取较大量DNA，用于下一步实验研究［1］。　　1材料与方法　　1.1材料每个样本取SD大鼠肝脏0.1g，共做24个样本，以8个样本为一组，每组水浴时间不同，Ⅰ组水浴2.5h；Ⅱ组水浴5h；Ⅲ组水浴7.5h。　　1.2主要试剂细胞裂解液：30mMTris-HCl，0.1mMEDTA，0.1mMNaCl，pH8.0；10mg/ml蛋白酶K、SDS、饱和酚、氯仿、异戊醇、无水酒精、1mol/LTE缓冲液。　　1.3方法　　1.3.1酚-氯仿提取组织基因组DNA［2］(

3、1)取100mg肝脏加1ml细胞裂解液，用玻璃匀浆器匀浆；(2)匀浆液倒入2ml塑料离心管中，加20μl蛋白酶K，再加SDS至终浓度为1％，上下颠倒混匀；(3)混合液置于55℃水浴，水浴时间分别为Ⅰ组2.5h、Ⅱ组5h、Ⅲ组7.5h；(4)水浴完毕后，向匀浆液中按1：1比例加酚/氯仿/异戊醇混合液（25：24：1），轻轻震荡混匀5min，12000g离心5min；(5)吸上层水相800μl于一灭菌塑料离心管中，加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液，轻轻震荡混匀5min，12000g离心5min；(6)吸上层水相500μl于一塑料离心管中，加入两倍体积的无

4、水乙醇，-20℃放置2h或液氮中放置5min；(7)12000g离心5min，沉淀DNA,倾去上清液；(8)于沉淀中加入75%乙醇溶液500μl，轻轻混匀后12000g离心5min，倾去上清液，室温凉干；(9)向DNA沉淀中加200μlTE缓冲液，-20℃保存备用。　　1.3.2DNA纯度和浓度的测定取10μlTE溶解的DNA溶于2500μl双蒸水中，用国产UV-754分光光度计测260nm和280nm吸光值，计算OD值和提取DNA的浓度和纯度。　　1.3.3统计学处理对三组样本的得率进行统计学处理，各组间检测数据均由均数±标准差表示；组间均值的比较

5、用单一因素方差分析（ANOVA）处理。　　2结果　　Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的DNA样品浓度和纯度检测结果分别见表1、表2和表3。　　表1各样本水浴2.5h提取DNA的各项数据　略　　表2各样本水浴5h提取DNA的各项数据　略　　表3各样本水浴7.5h提取DNA的各项数据　略　　对三组样本的DNA得率进行比较和统计学分析结果见表4。　　表4不同水浴时间酚、氯仿提取DNA得率比较（略）　　结果显示，用酚、氯仿提取肝脏DNA，随着水浴时间的延长（2.5～7.5h之间），DNA提取得率提高。Ⅰ组与Ⅱ组、Ⅱ组与Ⅲ组、Ⅰ组与Ⅲ组间所提DNA得率的比较，各组间均差异有显著性

6、。　　3讨论　　本研究采用组织DNA的酚-氯仿提取方法，在一定时间范围内（2.5～7.5h），改变水浴时间，随着水浴时间的延长，得到较多的DNA，可以更好地满足进一步实验的需要。对实验结果分析后发现，在酚-氯仿提取组织DNA的过程中，延长水浴时间后，在细胞裂解液、蛋白酶K和SDS的充分作用下，肝细胞裂解更充分，更多DNA从细胞中释放出来，提高了DNA得率。据