血管内皮细胞生长因子对骨缺损修复的影响论文

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1、血管内皮细胞生长因子对骨缺损修复的影响论文【摘要】探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）对肌肉骨膜瓣、松质骨颗粒和骨髓联合移植修复骨缺损中的影响.［方法］制作家兔桡骨骨缺损模型，在缺损区用肌肉骨膜瓣、松质骨颗粒及骨髓进行联合移植，于术后第1、2、4、6、8周时利用光学显微镜和免疫组织化学等方法检测VEGF在骨缺损修复不同阶段中对各种细胞内的表达情况.［结果］VEGF在骨缺损修复过程中的不同阶段的表达程度不同，在术后1～6周时(即软骨内化骨阶段)，新生的骨细胞、成骨细胞及软骨细胞内均可见大量的VEGF，其高峰出现在第4周.［结论］VEGF是骨缺损

2、修复过程中重要的生长因子，联合移植有利于骨缺损的快速修复.【关键词】血管内皮生长因子类骨缺损骨移植Effectsofvascularendothelialgrousculoperiostealflap,bonemarroentalbonedefectidupperofradialshaftofadultrabbits,andbinationofmusculoperiostealflap,bonemarromunohistochemistryatpostoperativeof1,2,4,6,8onetosixakesforrepairingth

3、ebonedefect.Keym，制作骨缺损动物模型，选择右前肢为实验肢，左前肢为对照肢.取髂后上棘切口，长度约为20mm，取出15mm×10mm大小的髂骨，刮取其松质骨颗粒备用；于胫骨上段前内侧切开皮肤约10mm,抽取骨髓2.0mL,自然状态下凝固备用.将实验组旋前圆肌置入骨缺损模型家兔实验肢骨缺损区，并将松质骨颗粒及骨髓植入旋前圆肌组织内，用桡骨骨膜包裹，用50无损伤线仔细缝合骨膜，再逐层缝合切口；而对照肢则未给予任何处理，直接缝合.分别于术后1、2、4、6、8周时随机选择模型家兔5只处死，分别于实验肢及对照肢桡骨骨缺损处取材，置于10

4、0g/L甲醛溶液固定24h，EDTA脱钙4周，每周换液1次，梯度酒精脱水，石蜡包埋，5μm厚组织切片，行HE及免疫组织化学染色.方法为组织切片脱腊，水化，EDTA热修复，过氧化氢封闭非特异性抗原，PBS冲洗3次，滴加第一抗体，4℃过夜；冲洗3次，滴加第二抗体，室温孵育10min；PBS冲洗3次，滴加辣根酶标记链霉卵白素，室温孵育10min；PBS冲洗3次，DAB显色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片.2结果2.1HE染色表现术后第1周对照肢炎性细胞减少，有少量纤维组织形成；第2～4周，缺损组织中纤维组织大量形成，但排列紊乱，伴有少量软骨细胞增生

5、；第4～6周，缺损组织中纤维组织排列整齐，可见软骨细胞及少量类骨样组织，呈软骨内化骨；第8周，缺损组织中可见软骨细胞，仅在骨折端可见骨痂形成，中间仍有纤维结缔组织.术后第1周实验肢缺损组织中可见大量的间充质细胞形成；第2周，可见大量间充质细胞向软骨细胞分化，同时有大量软骨细胞团形成；第4周，可见大量软骨细胞与条索状的新生骨细胞，仍有大量增殖的间充质细胞；第6～8周，缺损组织中软骨内化骨已形成完整的骨组织.2.2VEGF的影响术后第1周对照肢取材组织的炎性细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞内可见大量的VEGF；第2～4周，在骨折端成纤维细胞、血管内

6、皮细胞及软骨细胞内可见大量的VEGF(图1A)；第4～6周，在血管内皮细胞及软骨细胞内可见少量的VEGF；第8周，在取材组织中未见VEGF.术后第1、2周时实验肢成纤维细胞、血管内皮细胞及软骨细胞内可见大量VEGF；第2～4周，骨折端组织血管内皮细胞及软骨细胞内仍可见较多VEGF(图1B)；术后第6周，大量的软骨细胞内仍可见VEGF；术后第8周，在骨细胞中未见VEGF.3讨论目前，骨折后缺损骨修复的确切机制尚未十分清楚，而骨不连的预防与治疗亦是骨科难题.骨折修复是由多种因素参与的复杂的生物学过程，而与成骨有关的血管形成和成骨细胞活性的保持有赖

7、于成骨因子的刺激素［1］.VEGF糖蛋白，分子质量为34～45ku，可由多种哺乳类动物及人类的胚胎和成年组织中产生，可通过旁分泌强烈地刺激体内新生血管的生成，增加血管通透性，对维持血管的正常状态和完整性具有重要意义［2，3］.VEGF是目前已知的众多血管生长因子中作用最强［4］，其他促血管生成因子的作用均直接或间接地通过增强VEGF表达来实现.本实验用肌肉骨膜瓣、松质骨颗粒和骨髓联合移植修复长段骨缺损，并用HE、免疫组织化学染色和原位杂交的方法观察了骨缺损的修复时间与VEGF在细胞内表记情况.实验结果表明，在早中期骨缺损模型家兔实验肢缺损处组

8、织中可见大量的毛细血管形成，并伴有移植骨的吸收和软骨细胞的形成，在中后期见大量的软骨内化骨形成，骨组织进一步得到重建，一些软骨细胞也经钙化，骨髓腔已初步形成；原位杂