微波辐照对大鼠海马coxi、iv基因表达影响

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1、微波辐照对大鼠海马COXI、IV基因表达影响【关键词】微波；海马；细胞色素C氧化酶；能量代谢　　摘要：目的研究微波辐照后大鼠海马组织细胞色素C氧化酶(COX)亚基I、IVmRNA表达变化和对酶活性的影响，探讨微波辐照对大鼠海马能量代谢影响的机制。方法采用RT-PCR法检测微波辐照后海马组织COXI、IVmRNA水平，采用还原细胞色素C法和高效液相色谱法(HPIC)分别检测微波辐照后海马组织细胞色素C氧化酶活性和三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量。结果微波辐照后，大鼠海马组织细胞色素C氧化酶活性和ATP含量明显降低，并与COXI、IVmRNA表达变化呈一致性。

2、结论微波辐照可影响大鼠海马COXI、IVmRNA表达而降低酶的活性，进而引起能量代谢障碍。　　关键词：微波；海马；细胞色素C氧化酶；能量代谢　　EffectofmicroRNAexpressioninhippocampusofrats　　Abstract：ObjectiveTostudymRNAexpressionofcytochromecoxidase(COX)subunitⅠ,Ⅳandactivityofcytochromecoxidaseinhippocampusofratsaftermicroolecularmechanismofmicroetabolismdeficitinhipp

3、ocampusofrats.MethodsTheexpressionofcytochromecoxidasesubunitⅠandⅣmRNAaftermicroonophosphate(AMP)andactivityofcytochromecoxidaseinhippocampusanceliquidchromatography(HPLC)andreducedcytochromecmethodsrespectively.ResultsDecreasedactivityofcytochromecoxidaseandcontentofATPinhippocampusecoxidasesubuni

4、tⅠandⅣmRNARNAandavtivityofCOX,andfurthertoinduceenergymetabolismdeficitinhippocampusofrats.　　Keyicropus;cytochromecoxidase;energymetabolism　　现代生活与微波技术的应用密切相关，由此导致的环境污染问题已引起了广泛关注。本研究选择在细胞色素C氧化酶(COX)活性中起主要作用的催化亚基Ⅰ和调节亚基Ⅳ为观察指标，观察微波对COX活性和基因表达的影响，以期探讨微波辐照致大鼠海马能量代谢改变的分子机制。　　1材料与方法　　11材料(1)实验动物：健康雄性J公司)；凝

5、胶成像系统(美国BIO-RAD公司)；Du640紫外分光光度计(德国Beckman公司)；高效液相色谱仪(日本岛津公司)。(4)试剂：COXI引物(上游：5′GCTGCTAATACTGGCAGTGAGA3′，下游：5′GCTTCGGAAACTGACTTGTACC3′，扩增片段约381bp)；COXIV引物(上游：5′GGCAGCAGTGGCAGAATGTTGG3′,下游：5′ACAAGCGCAGTGAAGCCGATGA3′,扩增片段约364bp)；内参βactin(上游：5′TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT3′,下游：5′CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC3′，

6、扩增片段约241bp)，所有引物由上海Sangon公司合成。ATPNa2、ADPNa2、Cytc(美国Sigma公司)。　　12方法　　121动物辐照动物置于可透谢微波的专用辐照盒内，在反射近似零的辐照暗室接受全身一次性辐照20min，辐照环境温度和湿度用设备保持恒定，温度(18±2)℃，湿度50%～70%，对照组除不接受辐照原的作用外其他处理条件与辐照组一样。　　1.2.2海马组织腺嘌呤核苷酸测定［1］将大鼠断头处死，冰浴条件下分离海马，准确称重，按20μl/mg组织加入预冷的02mol/L高氰酸匀浆，4℃，18000g离心15min，上清液用1mol/L碳酸钾中和并调pH至65～70，重

7、复离心1次，取上清液作高效液相色谱分析，采用公式EC(energycharge,EC)=(ATP+05ADP)/(ATP+ADP+AMP)计算能荷。　　123海马组织COX活性测定［2］冰浴条件分离海马，将一侧海马准确称重，按100mg/ml加入10mmol/L预冷的磷酸钠缓冲液匀浆备用。取还原纯化好的015mmol/L细胞色素C05ml,加入10mmol/L磷酸钠缓冲液24ml摇匀，在37℃，波长550nm