照射后小鼠小肠上皮细胞tgf

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1、照射后小鼠小肠上皮细胞TGF【摘要】目的探讨TGF-β及其受体TGF-βR1和TGF-βR2在小鼠小肠上皮细胞受照射后再增殖中的作用及其意义。方法C3HF/Kam小鼠全身一次性5Gy照射后，不同时间内杀死小鼠取出空肠，HE染色后计数隐窝细胞数和分裂相，同时以免疫组化结合计算机图像分析技术定量测定照射后不同时间内TGF-β、TGF-βR1和TGF-βR2在隐窝区和绒毛区的表达。结果照射后3～4天小鼠小肠隐窝细胞和分裂相均达到高峰。而照射后一天TGF-β表达在绒毛区和隐窝区即下降至最低点；同时TGF-βR1和TGF

2、-βR2也不同程度的下降。结论TGF-β、TGF-βR1和TGF-βR2在小鼠小肠上皮细胞受照射后的再增殖过程中可能起着负反馈的调节作用。【关键词】小鼠小肠；照射；TGF-β；TGF-βR1；TGF-βR2【Abstract】ObjectiveTostudytheroleofexpressionsofTGF-β，TGF-βR1andTGF-βR2inrepopulationofjejunumfolloofC3HF/Kammouseasmaterial，themitoticindexandthenumberofc

3、ryptcellseasuredatdifferenttimesaftersingleetime，theexpressionsofTGF-β，TGF-βR1andTGF-βR2incryptareaandvilliareaatedimmunohistochemicalstainingmethod.ResultsThemitoticindexandthenumberofcryptcellsreachedpeaksthree-fourdaysafterirradiation.Meanedegreesbothincr

4、yptandinvilli.ConclusionTheresultsindicatethatthedecreasedexpressionofTGF-β，TGF-βR2playthenegativefeedbackroleinrepopulationofmousejejunumafterirradiation.【Keyousejejunum；irradiation；TGF-β；TGF-βR1；TGF-βR2已有研究表明，小鼠小肠的隐窝细胞是小肠的干细胞，小鼠小肠的再增殖开始于照射后的第3天。笔者的初步研究表明，小

5、鼠小肠上皮照射后的再增殖与转化生长因子TGF-α，上皮生长因子EGF及其受体EGF-R密切相关，TGF-α、EGF及EGF-R很可能在小鼠小肠上皮再增殖过程中起着类似“触发”信号的作用［1，2］。然而，小肠上皮的增殖过程是一“自控系统”，它的过程必然受多种因子的调节。本文研究另一类转化生长因子TGF-β及其受体在小鼠小肠上皮受照射后再增殖中的作用。1材料和方法实验采用16周龄的雄性C3HF/Kam纯系小鼠。放射源为250kV的X射线，吸收剂量率为1.6Gy/min。照射时将小鼠置于特制的有机玻璃盒内，小鼠不麻醉

6、。全身一次照射吸收剂量为5Gy。照射后不同时间拉颈处死小鼠，取出空肠，浸入10%福马林中，石蜡包埋。每个时间点取3只动物，每只动物取3张切片。部分切片常规HE染色后，高倍镜下计数每个隐窝的隐窝细胞数及分裂细胞。计数前者时取每50个隐窝的平均细胞数；计数后者时共计数500个隐窝细胞，然后换算成百分比。TGF-β及其受体TGF-βR1和TGF-βR2的表达测定采用ABC染色法。羊抗鼠的抗TGF-β、抗TGF-βR1、抗TGF-βR2的单抗隆抗体及配套的试剂盒均为Sigma公司的产品。测试步骤为：石蜡切片脱蜡水化；缓

7、冲液洗涤3次，马血清保护；第一抗体孵育60min，缓冲液洗涤：0.3%H2O2甲醇液阻断内源性过氧化物酶5min；ABC试剂孵育：0.04%DAB显色；流水洗涤：苏木素复染5min；脱水后透明封固。上述步骤均在室温下完成。免疫组化的定量测定：将已染色的玻片置于显微摄像机下，摄取后储存于计算机内，然后以特别编制的程序分别对绒毛区及隐窝区的染色进行定量处理，从而分别得到上述参数在绒毛区和隐窝区的定量表达，结果相对值的定义为该蛋白质表达的含量。该套分析程序由MDAnderson癌症中心生物统计室自行研制，详见照射后1

8、天，TGF-β在隐窝区及绒毛区的表达均降到最低点，照射后第2天即迅速恢复，到第3～4天已基平到照射前水平(图1、2)。在绒毛区，照射后第1天，TGF-βR1的表达也降到最低点，以后逐渐恢复，但直到照射后第4天仍然低于照前的水平(图3)。在隐窝区，TGF-βR1表达的变化在照射前后未见明显差异。照射后1天TGF-βR2在隐窝区的表达明显降低，但到第2天即已恢复到照射的水平(图4)。TGF