榄香烯联合生物大分子合成抑制剂对hca

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1、榄香烯联合生物大分子合成抑制剂对Hca作者:郭连英，陈骏，沈洁，邢嵘1，施广霞，钱振超【摘要】目的本实验采用榄香烯与生物大分子合成抑制剂联合处理小鼠肝癌细胞Hca-F，观察肿瘤细胞增殖、凋亡和形态学的变化，探讨抑制/干扰肿瘤细胞的DNA、RNA或蛋白质合成对榄香烯抗瘤作用的影响，以期为判断榄香烯作用的可能靶点提供线索与依据。方法将Hca-F肝癌细胞用榄香烯（50μg/ml）、吡柔比星（THP）（10μmol/ml）、单独和复合处理，设单独瘤细胞（不处理）为阴性对照。Hca-F细胞浓度均为1×106/ml，每个观察时间点均设3支复管，用台盼蓝拒染法计算细胞存活率，在透射电镜下观察榄香烯与TH

2、P联合处理对肿瘤细胞超微结构的影响，用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果榄香烯联合吡柔比星处理Hca-F比单独使用两种药物的抑瘤率都高。结论本实验所用生物大分子合成抑制剂不能阻断榄香烯的抗瘤作用，提示榄香烯抗肿瘤作用对新的蛋白质表达依赖性较低。结合榄香烯处理后瘤细胞形态学的变化，提示榄香烯可能作用于肿瘤细胞膜或细胞中的某些蛋白质（如酶）等而直接杀伤肿瘤靶细胞，使对榄香烯抗瘤作用靶点的认识又进了一步。本实验结果表明榄香烯和THP合用可使抗癌作用增强，这对榄香烯联合其他药物治疗肿瘤可能有一定参考意义。【关键词】榄香烯；抑制剂；肝细胞癌Theeffectofelemenebinedacrom

3、olecularsynthesisforhepaticcancer【Abstract】ObjectiveInthisexperimentofHca-Fcells(amurinehepaticcellcarcinoma)enebinedacromolecularsynthesis，thEirproliferation，survival，cellcycle，apoptosisandmorphologyoreffectsofelemeneandtofindthepossibletargetsiteofelemene.MethodsTheHca-Fcellsingledtreatedene（50μ

4、g/ml），aloneorbinedol/ml），theHca-Fcells(ent)l，threetublesineverytimepoint.TocalculatetheproportionofsurvivalpactontheultrastructureofHca-FcellstreatedeneandTHPintransmissionelectronmicroscope，andexaminetheapoptosisandcellcyclesinfloeter.ResultsTheinhibitionrateofproliferationofHca-FtreatedeneandTHP

5、eneonly.ConclusionTheseresultsshooreffectsofelemenecouldnotabolishedbybinedtreatmentorpretreatmentoreffectsofelemenemaybeindependentontheirsynthesis.binedusageofelemeneene；inhibitor；hepatocellularcarcinoma榄香烯(elemene)是从中药温莪术（经鉴定为我国特有新种定名为温郁金，CurcumaI1640培养基（GIBCO，USA）。1.4Hca-F细胞悬液的制备将传代保种的Hca-F腹水型

6、肝癌细胞常规接种于小鼠腹腔，0.2ml/只，收集第7～8天的腹水（肿瘤细胞生长最旺盛时期，死亡细胞和红细胞含量较少），HS液破除红细胞，PBS洗3次，计活细胞数，用含20%小牛血清RPMI1640培养液调细胞数至所需浓度。1.5Hca-F肝癌细胞的处理将Hca-F肝癌细胞用榄香烯（50μg/ml）、吡柔比星（10μmol/ml）按本室常规方法单独或复合处理，设单独瘤细胞（不处理）对照。Hca-F细胞浓度均为1×106/ml，每个观察时间点均设3支复管，加入相应的药品，以台盼蓝拒染法于不同时间计数活细胞数，计算存活率。1.6单纯榄香烯处理和榄香烯联合THP处理对Hca-F增殖的影响用MTT法

7、测其OD值。1.7榄香烯联合THP处理对瘤细胞超微结构的影响［3］Hca-F细胞用榄香烯、THP单一或复合处理，细胞浓度和处理方法同前，处理时间为1h，收细胞，用PBS洗3次，以2.5%戊二醛固定，常规包埋制片，铀—铅双染色，透射电镜下观察摄片。1.8细胞凋亡的检测和细胞周期的测定细胞收集同前，用PBS洗3次，加入PI染色液染色30min（避光、室温）。上机检测，Cellquest软件低速获取。用Modfit2.0软件分