黄连多糖含量测定及抗氧化活性研究

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1、黄连多糖含量测定及抗氧化活性研究吴玉娟王懿萍姜延伟，姜怡【摘要】　　目的比较3种pH值条件下提取的黄连多糖的含量及抗氧化活性差异。方法采用蒽酮－硫酸法测量黄连多糖的含量。分别测定黄连多糖对·OH，O2-·，DPPH的抗氧化活性。结果黄连药材中多糖含量为：碱提取多糖>水提取多糖>酸提取多糖。抗氧化研究结果表明，在pH值中性条件下，水提取多糖经木瓜酶与Sevag法除蛋白得到的多糖在抗氧化实验中显示出较好的效果，对·OH的EC50为83.913μg/ml，对DPPH的EC50为249.856μg/ml，对O2-·则无明显的抑制作用。结论黄连多糖可作为抗氧化剂，具

2、有较好的清除自由基的作用。【关键词】黄连多糖含量测定抗氧化活性　　Abstract：ObjectiveToparethedifferencesofcontentandantioxidantactivityofCoptischinensispolysaccharidesbetethodentshoethodhadbettereffect.EC50ofPSA3against·OHl，andagainstDPPHl.ButPSA3hadnoeffectagainstO2-·.ConclusionCoptischinensishasfreeradicalscavenginga

3、ctivityandcanbeusedasaantioxidant.　　Key-1）。　　1.2仪器　　TU1901紫外-可见分光光度计，北京普析；FA1004-53423电子天平(0.0001g)，上海精科；TDL-5-A低速大容量离心机，上海安亭；DZF-6030B真空干燥箱，上海齐欣。KL-UP超纯水器，成都优普；PHS-3C型pH计，上海雷磁；JJ-1A60/20。式中C为测得的样品溶液的葡萄糖质量浓度(μg/ml)，D为样品溶液的稀释倍数，V为供试液体积(ml)，为醇沉后得到的多糖的质量(g)。　　2.3抗氧化活性研究　　2.3.1黄连多糖对·OH的抑制作用

4、　　原理：采用Fenton体系〔3〕测定黄连多糖对·OH的抑制作用。·OH由EDTA-Fe-H2O2产生，由于·OH可特异性地使番红花红T褪色，根据褪色程度可以衡量·OH生成量。经波长扫描，反应体系在554nm处有最大吸收。　　方法：在具塞试管中依次加入100μg/ml番红花红T2ml，0.2mol/LpH7.4的PBS2ml，100μg/ml供试液2ml，0.3%H2O22ml，0.15mmol/LEDTA-Fe2+2ml，混匀后37℃水浴30min。抑制率(E)=(A样品-AEmin)/(AEmax-AEmin)，式中Emin为以水代替供试液，Emax为以水代替供

5、试液和EDTA-Fe2+。　　2.3.2黄连多糖对O2-·的抑制作用　　原理：邻苯三酚在碱性条件下能迅速自氧化，释放出超氧阴离子，生成的中间产物在紫外区有吸收〔4〕。经波长扫描，在320nm处有最大吸收。经时间扫描，该反应在4min后趋于平缓。　　方法：在具塞试管中依次加入100μg/ml供试液4ml，0.05mol/LpH8.2的Tris-HCl4ml，37℃水浴预热10min，再加入4mN－1mN邻苯三酚－盐酸溶液1ml，混匀后在37℃水浴中以跑表计时准确反应4min，立即用6mol/LHCl1ml终止反应。抑制率(E)=(AEmax-A样品)/(AEmax-AE

6、min),式中Emin为以水代替供试液、Tris-HCl，Emax为以水代替供试液。　　2.3.3黄连多糖对DPPH的清除作用　　原理：DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)是一种带有不配对电子的比较稳定的自由基，其N原子上有一个游离电子。DPPH的40%乙醇-水溶液在526nm处有最大的吸收峰。加入抗氧化剂后，DPPH捕捉一个电子与游离电子配对，在526nm处的吸收减弱〔5，6〕。　　方法：在棕色容量瓶中加入100μg/ml供试液6ml，60μg/mlDPPH醇溶液4ml中，混匀后在室温下反应30min。对DPPH自由基的清除率(E)

7、=(AEmax-A样品)/AEmax，式中Emax为以水代替供试液。　　3结果与结论　　3.1结果　　3.1.1标准曲线的制备及含量测定通过蒽酮－硫酸法测得实验结果（见表2），标准曲线方程为Y=0.0069X+0.0004，r2=0.9997，线性范围：15.07～131.01μg/ml。表2黄连多糖纯度及含量测定结果（略）　　3.1.2黄连多糖对·OH的抑制作用　　实验结果表明，9种多糖水溶液对·OH的生成均有较强的抑制作用，见图1。　　以不同浓度的PSA3作量效关系实验(见表3)。采用SPSS13.0软件作概率单位回归(ProbitAnalysi