参与dna复制有关的酶和蛋白质

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1、参与DNA复制有关的酶和蛋白质现在已经知道约20多种蛋白质参与复制。（1）聚合酶（2）解链、解旋酶类（3）引发酶（4）连接酶下表是与大肠杆菌复制有关的蛋白质。蛋白质名称分子量×103U亚基数功能每个菌中的分子数毫克蛋白质公斤细胞（湿重）SSBi蛋白n蛋白n′蛋白n″蛋白dnaCdnaB引发酶7480257511293006044111161与单链结合预引发预引发部位识别,ATPase预引发预引发移动启动子,ATPase引发合成300503070-1002050200.50.30.30.2表与大肠杆菌复制有关的蛋白质接下页BACK蛋白质名称分子量×

2、103U亚基数功能每个菌中的分子数毫克蛋白质公斤细胞（湿重）PolⅢ全酶αεθβγδτ1402510375232831121211链的延长300200.5PolⅠ1091填补缺口和切去引物30010连接酶741连接30010拓扑异构酶Ⅱαβ400210190422引进超螺旋_25025rep蛋白解链酶ⅡdnaA65754811解开双链复制起始5050002000.6Rep蛋白是一种大肠杆菌解链酶1DNA聚合酶DNA聚合酶是指以脱氧核苷三磷酸作为底物催化合成DNA的一类酶。全称：DNA依赖的DNA聚合酶(DNA-dependentDNApolyme

3、rase)简称：DNA-pol活性：1.53的聚合活性2.核酸外切酶活性所有DNA聚合酶的作用方式基本相似。它们催化脱氧核苷三磷酸加到复制中的DNA链的3ˊ羟基末端，合成方向从5ˊ→3ˊ，由模板决定加上何种脱氧核苷酸。5´AGCTTCAGGATA3´

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14、3´TCGAAGTCCTAGCGAC5´35外切酶活性53外切酶活性?能切除突变的DNA片段和RNA引物。能辨认错配的碱基对，并将其水解。核酸外切酶活性目录DNA聚合酶的分类DNA-polⅠ主要的修复酶DNA-polⅡ次要的修复酶DNA-polⅢ复制酶DNA-

15、polIVSOS修复DNA-polVSOS修复原核生物的聚合酶(1)大肠杆菌DNA聚合酶I(PolⅠ)纯的DNA聚合酶I由分子量109000U(109KD)，含928个氨基酸残基的一条肽链构成，每个大肠杆菌细胞中大约含400个酶分子。(单链多肽）功能：对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补。323个氨基酸小片段（34KD）5核酸外切酶活性大片段/Klenow片段（76KD）604个氨基酸DNA聚合酶活性5核酸外切酶活性N端C端枯草杆菌蛋白酶或胰蛋白酶DNA-polⅠDNA聚合酶Ⅰ的多种活性。①5′→3′聚合活性：

16、在模板指导下，以脱氧核苷三磷酸为底物在引物3ˊ-OH末端加上脱氧核苷酸。每个酶分子每分钟添加1000个单核苷酸。聚合酶催化的DNA的合成需要以下条件：▲模板▲四种脱氧核苷酸▲必须有一3′-OH末端的引物，且此引物必须与模板正确形成氢键▲合成从5ˊ→3ˊ方向进行，如图7-8和图7-9所示②3′→5′外切酶活性：没有脱氧核苷三磷酸底物时，DNA聚合酶I能从3′-OH开始以3′→5′方向水解DNA，产生5ˊ-单核苷酸。实际上DNA复制时，加上去的脱氧核苷酸不一定每次都正确，错误的机会不少，有时甚至加上一个不与模板配对的核苷酸，当3ˊ-OH末端的碱基不与

17、模板配对时聚合酶就无聚合活性，此时它具有的3ˊ→5ˊ外切酶活性可以切除这个不配对的核苷酸，这一碱基切除后，外切核酸酶活性终止，聚合酶活性恢复，如图7-10所示。所以聚合酶的3ˊ→5ˊ外切酶活性也叫修补活性。③5′→3′外切酶活性：DNA聚合酶I具有5′→3′外切酶活性。如图7-11，其特点是：▲只能在5ˊ-P末端一个接一个地切除核苷酸；▲能连续地切除多个核苷酸；▲只切除配对的5ˊ-P末端核苷酸，不切除不配对的单链5ˊ-P末端核苷酸；▲既能切除脱氧核苷酸也能切除核苷酸；▲对只具有5ˊ-P末端的切口也有活性（由于在DNA复制过程中一般情况下只在RNA

18、引物处才有缺口，因此5′→3′外切酶活性的主要功能是切除核糖核苷酸引物）。切口翻译(nicktranslation)DNA聚合酶I的5ˊ→3ˊ外切酶活性和聚合活性同时作用可以进行切口翻译(nicktranslation)，用来制造放射性探针。在反应物里加入同位素标记的脱氧单核苷酸，DNA聚合酶I首先利用5ˊ→3ˊ外切酶活性，从切口处逐个切下DNA上的核苷酸，再利用3ˊ-OH末端聚合作用逐个将标记的核苷酸加上去(图7—12)。5'3'5'3'④内切酶活性：DNA聚合酶I也具有5ˊ→3ˊ内切酶活性，如图7-13所示。在两个碱基之间切开产生一个具有5ˊ

19、-P末端的不配对碱基的片段。很多实验证明DNA聚合酶I在大肠杆菌复制中不是主要的合成酶，而是在除去RNA引物和损伤修复中起重要作用。不配