硒对砷染毒致雄性大鼠生殖损害的拮抗作用

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1、硒对砷染毒致雄性大鼠生殖损害的拮抗作用郭贵华，杨丽，沈振华，黄月娜【摘要】目的探讨硒对高砷所致雄性大鼠生殖损害的拮抗作用。方法50只雄性ethods50malealereproductivetoxicity砷是一种自然界广泛存在，并有类金属特性的元素，其化合物主要以三氧化二砷、二硫化二砷（雄黄）、三硫化二砷（雌黄）、硫砷化铁的形式存在。长期暴露在含砷高的环境中，可以引起急、慢性砷中毒、致畸、致突变和致癌作用，损伤人体心脏、肝脏、肾脏、皮肤、生殖等多个器官和系统。作为一种肯定的生殖毒物，近年来对于砷生殖毒性的研究逐渐得到重视，特别是对雄性生殖毒性的研究越来越多[1，2]。但硒对砷所致雄性

2、生殖毒性的拮抗作用报道较少，我们研究一定量的硒对砷化物的生殖毒性可能产生的影响，揭示硒对砷致雄性生殖损害拮抗作用的机制，并尽力找出最佳剂量，为砷中毒的预防和治疗提供科学依据。1材料与方法1.1动物模型的建立健康雄性清洁级g/kg，取该LD50的1/10为剂量。砷组含150mg/LAs2O3去离子水；砷加低硒组饮含150mg/LAs2O3及0.5mg/L亚硒酸钠的去离子水；砷加中硒组饮含150mg/LAs2O3及2.0mg/L亚硒酸钠的去离子水；砷加高硒组饮含150mg/LAs2O3及4.0mg/L亚硒酸钠的去离子水；对照组给予等量双蒸水，方法相同。1.2检测指标1.2.1动物体质量、睾

3、丸和附睾质量及其脏器系数参照文献[3]方法检测动物体质量、睾丸和附睾质量及其脏器系数。1.2.2精子计数、活动率及畸形率分析处死大鼠后，立即取一侧附睾尾，置37℃4ml生理盐水中剪碎，滤除组织碎片后，加1ml生理盐水制备精子悬液，用血细胞计数板计数精子数，400倍光学显微镜下伊红染色1～2min后镜检并计算精子活动率；取新鲜精子滤液2滴滴于载玻片上，室温下自然干燥后经甲醇固定，体积分数为2%伊红染色3h后在400倍光学显微镜下观察精子形态、计数畸形精子百分率（精子畸形以无钩、大头、香蕉形、双头、双尾等为指标）。1.2.3睾丸、附睾生化标志酶测定制备睾丸、附睾组织匀浆，用南京建成生物工程

4、研究所的乳酸脱氢酶（LDH）和ATP酶测试盒检测睾丸中的LDH和附睾中的ATP酶含量（单位用每小时每mg蛋白中有机磷的μmol表示）。1.2.4性激素测定处死大鼠前抽取下腔静脉血，分离血清，用深圳拉尔文生物工程有限公司的血清睾酮（Testosterone,T）和血清促黄体生成激素（Luteinizinghormone,LH）放射免疫测定试剂盒测定血清睾丸酮和血清促黄体生成激素。1.2.5睾丸组织病理切片按照文献方法[4]将睾丸组织切片固定、脱水、染色后于光镜下观察生精上皮细胞的层次、形态结构，脱落的细胞及管腔拥塞程度，支持细胞的数量与形态改变。1.2.6初级精母细胞染色体畸形分析参照文

5、献方法[5]，染色体畸形主要包括染色体断裂、断片、裂隙及多倍体等。1.3统计学处理采用SPSS（10.0）软件包进行分析，计数资料以±s表示，采用t检验，计量资料用χ2检验。2结果2.15组大鼠睾丸组织病理学检查对照组睾丸生精上皮细胞有5～8层，形态结构完整，管腔中无脱落的细胞，可见大量成熟精子(图1)；砷组的各级生精细胞数量减少，结构疏松，成熟精子的数量减少(图2)；砷加低硒组和砷加中硒组的各级生精细胞数量较砷组有所增加，形态结构较正常，间质细胞的数量和结构也较正常，可见许多成熟精子(图3，4)。砷加高硒组仍可见到各级生精细胞数量减少，管腔中有脱落的精子和组织，成熟精子数量减少(图5

6、)。　　2.25组大鼠体质量、睾丸和附睾质量及其脏器系数（表1）2.35组大鼠睾丸、附睾生化标志酶含量测定结果（表2）2.45组大鼠精子计数、畸形率及活动率分析（表3）表15组大鼠右侧睾丸和右侧附睾质量及其脏器系数比较与对照组比较，*P＜0.05表25组大鼠睾丸、附睾生化标志酶含量比较与对照组比较，*P＜0.05；与砷组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01表35组大鼠精子计数、畸形率和活动率比较与对照组比较，*P＜0.05；与砷组比较，△P＜0.05，△△P＜0.012.5初级精母细胞染色体畸形分析对照组初级精母细胞染色体畸形率为6.50%，砷组为9.90%，砷加低硒组为18.20%

7、，砷加中硒组为14.60%，砷加高硒组为17.30%，组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。2.65组大鼠血清性激素的检测（表4）表45组大鼠血清性激素含量比较与对照组比较，*P＜0.05；与砷组比较，△P＜0.05，△△P＜0.013讨论有关砷与生殖系统之间的关系，已受到人们的高度关注，不少资料表明，砷及其化合物具有遗传毒性，可使染色体畸形率增高，姊妹染色体交换试验频率及微核率增加[6]。近年来人们已注意到砷的雄性生殖毒性问题，本研究结