复方贞术调脂胶囊水提液絮凝澄清工艺研究

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1、复方贞术调脂胶囊水提液絮凝澄清工艺研究【摘要】目的优选复方贞术调脂胶囊水提液最佳絮凝澄清工艺。方法采用正交实验法,以丹酚酸B、总多糖、总酚酸含量及总固体得率为指标,考察壳聚糖用量、药液浓度及pH值对絮凝澄清工艺的影响。结果壳聚糖用量对丹酚酸B、总多糖、总酚酸的含量及总固体得率有显著性影响(F0.05),药液浓度、pH无显著性影响。结论生药∶药液=1∶3,,pH=4.0,壳聚糖加入量为0.24ml/g生药为最佳絮凝澄清工艺。【关键词】复方贞术调脂胶囊;壳聚糖;澄清工艺 复方贞术调脂胶囊为多年临床经验方,用于高脂血症及脂代谢紊乱相关疾病的治疗,疗效显著,已获国家

2、发明专利。该方由丹参、白术、佛手等中药组成,具有健脾益肾、舒肝化痰、理气凉血、祛瘀解毒之功效。前期研究结果显示,丹参、白术、佛手中水溶性组分具有调节血脂,抗脂质过氧化,抗动脉粥样硬化等作用[1~3]。因此,丹参、白术、佛手等药材以水为提取溶剂进行提取,但在有效成分被提取出的同时,大量水溶性杂质也被提出。为去除杂质,富集有效成分,提高制剂的稳定性,在前期实验研究确定采用壳聚糖絮凝法精制的基础上,本实验进一步采用正交实验法,以丹酚酸B、总酚酸、总多糖含量及总固体得率为指标,优选最佳的絮凝澄清精制工艺条件。  1仪器与试药  DIONEXultimate3000(

3、德国);UV-1101型分光光度计(上海天美);RE-52AA旋转蒸发器(上海嘉鹏科技有限公司);BS423S型电子分析天平(北京赛多利斯);KQ-250型医用超声波清洗机(昆山超声仪器有限公司,功率250)滤过,浓缩,定容至3000ml,作为样品溶液。  2.2壳聚糖絮凝剂的制备称取壳聚糖1g,加入2%的醋酸溶液100ml,搅拌,静置24h,搅拌均匀,配制成1%的溶液。  2.3精制工艺实验根据预实验结果,选出壳聚糖用量、药液浓度、pH值3个试验因素,每因素3水平(见表1)。按L9(34)正交实验表进行实验安排,在一定温度(50℃)下,加入壳聚糖絮凝剂,搅

4、匀(50r·min-1),静置,离心,取上清液,定容,作为样品溶液。分别测定各样品溶液中总多糖、总酚酸、丹酚酸B的含量及总固体得率。表1因素水平  2.4总多糖含量测定  2.4.1葡萄糖标准曲线的绘制精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖0.0556g,加水溶解并定容50ml量瓶中,制成每毫升含1.112mg的溶液,作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0ml至50ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,精密吸取上述各浓度溶液2ml,分别加入2%苯酚溶液1ml,摇匀,迅速加入浓硫酸5ml,摇匀,静置5min,至沸水浴中加热15mi

5、n,取出,快速用冷水冷却至室温。以水为空白,同样显色操作制备空白对照,于紫外可见分光光度计490nm波长处测其吸光度。以葡萄糖毫克数为横坐标,以吸光度为纵坐标,得回归方程Y=2.8122X+0.1406,r=0.9993。葡萄糖在0.02224~0.13344mg范围内与吸光度呈良好线性关系。  2.4.2供试品溶液制备分别精密量取各正交实验所得浓缩液各100ml,加乙醇使含醇量达85%,静置,滤过,滤渣分别用无水乙醇、丙酮洗涤,干燥,加水溶解并定容至25ml,作为供试品溶液。  2.4.3稳定性考察精密量取供试品溶液100μl,置25ml刻度试管中,按“2

6、.4.1”项下方法操作,测定吸光度,然后每隔30min测定1次(n=6),150min内吸光度基本不变,表明供试品在150min内基本稳定。  2.4.4含量测定精密量取各供试品溶液100μl,置25ml试管中,按“2.4.1”项下方法操作,测定吸光度,计算总多糖的含量。结果见表2。  2.5总酚酸测定  2.5.1原儿茶醛标准曲线的绘制精密称取原儿茶醛对照品0.01422g于25ml量瓶中,加水溶解定容至刻度,摇匀,即得。分别吸取原儿茶醛对照品溶液0.5,1,1.2,1.5,2ml于20ml量瓶中,分别加入0.5%亚硝酸钠溶液5ml,摇匀,放置12min后

7、,加入10%硝酸铝溶液0.5ml,摇匀,放置12min后,加入1mol·L-1氢氧化钠溶液5.0ml,加水稀释至刻度,摇匀,10min后,用紫外可见分光光度计于490nm波长处测定吸光度[4],以原儿茶醛毫克数对吸光度绘制标准曲线,结果原儿茶醛在0.2844~1.1376mg范围内与吸光度呈良好线性关系,回归方程为:Y=0.9314X-0.0666,r=0.9988。  2.5.2稳定性实验精密量取供试品溶液于20ml量瓶中,按“2.5.1”项下方法操作,每间隔10min测定1次,测定结果表明,显色后60min内供试品基本稳定。  2.5.3含量测定精密量取

8、各供试品溶液100μl,置25ml刻度试管中,按“2

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