赤芝子实体的化学成分及细胞毒活性的研究

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1、赤芝子实体的化学成分及细胞毒活性的研究满淑丽高文远颜璐璐张萱【摘要】目的对赤芝子实体进行化学成分研究，并对单体化合物进行细胞毒活性测定。方法利用硅胶柱层析，SephadexLH-20柱色谱以及HPLC等手段分离纯化得到单体化合物，并进行结构鉴定，通过MTT法对其进行细胞毒活性测定。结果从赤芝子实体中分离并鉴定了3个单体化合物的结构，分别是灵芝醇B（Ⅰ），麦角甾醇（Ⅱ）和过氧化麦角甾醇（Ⅲ），这3个化合物对小鼠肺腺癌LA795细胞的IC50分别为77.9，22.5，84.9μg/ml。结论3种化合物皆有细胞毒活性，其中以麦角

2、甾醇（Ⅱ）为最好。【关键词】灵芝分离鉴定细胞毒活性赤芝Ganodermalucidum(Leyss.exFr.)Karst系担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，具有补中益气、滋外强壮、扶正固本、延年益寿等功效，被列为名贵药材。20世纪70年代以来，我国学者在中西医结合的学术思想指导下，运用现代医药生物技术先后对多种灵芝属真菌的子实体、菌丝体、孢子粉及发酵液的提取物或有效成分进行了系统的化学、药理学研究，对灵芝扶正固本作用的机理进行了有益的探索〔1〕。近年来，灵芝有效成分的分析及药理作用，临床应用等的研究已经引起国际上的关注。为了进

3、一步研究其活性成分，本实验对赤芝子实体进行提取分离，得到3个化合物，经鉴定其结构分别为灵芝醇B（ganoderiolB，Ⅰ），麦角甾醇（ergosterol，Ⅱ）和过氧化麦角甾醇（ergosterolperoxide，Ⅲ），其体外抗肿瘤活性作用研究表明对小鼠肺腺癌LA795细胞具有细胞毒活性。1仪器与材料GulliverSeries高效液相色谱仪(日本JASCO公司)；核磁共振谱仪(VARIANINOVA500MHz)；TECANA-5002Spectra型酶标仪(奥地利)。实验用硅胶(青岛海洋化工)；SephadexLH

4、-20(AmershamPharmaciaBiotech)；RPMI1640培养基(Gibco公司)；胎牛血清(天津市庆星科技有限公司)；噻唑蓝(MTT，Sigma公司)；二甲基亚砜(DMSO，Sigma公司)。赤芝Ganodermalucidum(Fr.)Kart，由天津中新药业提供，经天津大学药物科学与技术学院高文远教授鉴定，植物标本现存于天津大学药物科学与技术学院天然药物学实验室。小鼠肺腺癌LA795细胞株，由中国协和医科大学基础医学研究所提供。2提取分离将赤芝药材（5kg）粉碎，用95%的乙醇（药材的10倍量）加热

5、回流提取5h，过滤，滤渣再用10倍量95%乙醇加热回流提取，如此提取5次，合并滤液，减压浓缩至浸膏状，得提取物250g。将浸膏混悬水溶液分别用石油醚，醋酸乙酯，正丁醇萃取。其中石油醚层部分30g（100～200目硅胶400g装柱），干法上样，采用石油醚－醋酸乙酯溶剂系统6个梯度（50∶1，20∶1，10∶1，5∶1，2∶1，0∶1）洗脱，共收集得到12个组份，从其第10个组分中经过硅胶层析分离得到化合物Ⅰ（218.2mg）。醋酸乙酯层部分40g以（100～200目硅胶1000g装柱）CHCl3-MeOH（100，99∶1，

6、98∶2，95∶5，9∶1，85∶15，80∶20∶2，70∶30∶3，6∶4，5∶5）梯度洗脱，共得到16个组分，对其第2个组分进行重结晶得到化合物Ⅱ，剩余部分经过凝胶柱层析和正相HPLC分离，得到化合物Ⅲ（10mg）。3结构鉴定化合物Ⅰ：白色晶体，1H-NMR(CDCl3，500Hz)δH：5.47(1H，d，J=6Hz，7-H)，5.32(1H，d，J=6.5Hz，11-H)，5.40(1H，t，J=7Hz，24-H)，3.24(1H，dd，J=11.5，4.5)，4.00(2H，s，26-H)，1.67(3H，s，

7、27-H)，1.01(3H，s，29-H)，0.985s(3H，s，30-H)，0.92(3H，d，J=6.5Hz，21-H)，0.88(3H，s，28-H)，0.88(3H，s，19-H)，0.57(3H，s，18-H)。13MR数据见表1，以上数据与文献报道〔2〕的灵芝醇B相符。化合物Ⅱ：白色晶体，1H-NMR(CDCl3，500Hz)δH:5.568(1H，d，6-H)，5.384(1H，d，7-H)，5.204(1H，m，22-H)，5.204(1H，m，23-H)，3.637(1H，m，3-H)，1.038(3H

8、，d，21-H)，0.946(3H，s，19-H)，0.918(3H，d，25-H)，0.846(3H，d，27H)，0.831(3H，d，28H)，0.631(3H，s，18-H)。以上数据与文献报道的麦角甾醇〔3〕相符。分别以氯仿/甲醇(98:2，V/V)，石油醚/乙酸乙酯(1:4，V/V)做层析液