liuxh实验一显微镜的构造原理及使

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1、细胞生物学实验刘小红电话：13330761109QQ：350783409Email:350783409@qq.com生命科学学科院生物技术教研室实验安排实验一、显微镜的构造原理及使用方法实验二、细胞凝集现象的观察实验三、细胞膜的渗透性实验四、叶绿体的分离及荧光现象的观察实验五、线粒体的分离及观察实验六、DNA的Fulgen染色法实验七、植物细胞骨架的观察实验八、RNA的Brachet反应实验九、植物的组织培养实验一显微镜的构造原理及使用方法一、普通光学显微镜二、常见特殊显微镜三、电子显微镜一、普

2、通光学显微镜Ordinaryopticalmicroscope（一）基本构造（二）放大原理及光路图（三）性能和质量（四）使用方法（五）使用注意事项1、机械部分（1）镜座（2）镜柱（3）镜臂（4）镜筒（5）转换器（6）载物台（7）调节器2、照明部分（1）反光镜（2）聚光器（3）光圈3、光学部分（1）目镜（5×，10×，15×）（2）物镜（低：10×或15×；高：40×或45×；油：100×）（一）基本构造普通显微镜的结构示意图（左：单目；右：双目）1、目镜；2、镜筒；3、物镜转换器；4、物镜；5、

3、通光孔；6、聚光器；7、光圈；8、反光镜；9、粗调节器；10；细调节器；11、镜臂；12、移片器；13、载物台；14、倾斜关节；15、镜柱；16、镜座；17、标本移动器螺旋；18、灯室细胞中期图片左：低倍镜；右：高倍镜（二）放大原理及光路图（三）性能和质量1、分辨率（resolution)指能分辨出的相邻两个点间最小距离的能力。r=0.61λ/(n·sinα)r：分辨力；λ：照明光源的波长；n：介质的折射率；α：样品对物镜孔径角的半角；0.61：恒定的参数。注：n·sinα的量称为物镜的数值孔径

4、，缩写为NA；r越小，则分辨率越高。要增大数值孔径，孔径角无法增大，只能增大介质的折高压率，这样就诞生了水浸物镜和油浸物镜，目前最大NA值可达1.4。透镜的焦距透镜的角孔径2、放大率（magnification)指最终成像的大小与原物体大小的比值。总放大率=物镜放大倍数×目镜放大倍数空气介质：可达1000倍油介质（通常是香柏油）：可达1400倍分辨本领光源透镜是否需真空光学显微镜300nm可见光玻璃透镜否200nm(油）可见光玻璃透镜否100nm紫外光石英透镜否电子显微镜0.1nm电子束电磁透镜

5、是电子显微镜和光学显微镜的基本区别（四）使用方法1、用前的准备工作（1）取显微镜；（2）完好性检查2、低倍镜的使用（1）准备；（2）对光；（3）放标本片（4）调节焦距3、高倍镜的使用4、油镜的使用方法5、使用练习（五）使用注意事项1、持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。2、轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，应放在距边缘10cm处，以免碰翻落地。3、观察有液体的临时标本时要加盖片，以免液体污染镜头和显微镜。4、粗、细调节钮要配合使用，不能过度调

6、节，调时侧面注视镜筒下降，以免压坏标本和镜头。5、保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。6、水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即用擦镜纸擦净。7、放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。8、要养成两眼同时睁开观察的习惯，以左眼观察视野，右眼用以绘图。9、不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。10、使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转

7、器使镜头离开通光孔，下降镜台，平放反光镜，下降集光器(但不要接触反光镜)、关闭光圈，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回实验台柜内。最后填写使用登记表。(注：反光镜通常应垂直放，但有时因集光器没提至应有高度，镜台下降时会碰坏光圈，所以这里改为平放)二、常见特殊显微镜（一）暗视野显微镜（二）相差显微镜（三）荧光显微镜（四）倒置显微镜（五）激光共聚焦扫描显微境（一）暗视野显微镜Darkgroundmicroscope1、原理根据光学上的丁道尔（Tyndoll）现象，微尘细粒在强光直射通过的情况下，不能为

8、人眼所见，这是因为光线过强及绕射现象等因素，因而看不到微尘的形象。若把光线斜射它们，则由于光的反射或衍射的结果，微尘细粒似乎增大了体积，而为人眼可见。据此原理，使光不直接通过样品而是斜射到样品上，即可在暗视野下观察细微粒子。2、构造及光路光源的中央光束被阻挡，不能由下而上地通过标本进入物镜。从而光线改变途径，倾斜地照在标本上，标本遇光发生反射、衍射或散射，散射和衍射光线进入物镜内，因而整个视野是黑暗的。在暗视野中，观察到的是被检物体的衍射光和散射光的图像，并非物体的本身，所以只能看见物体的存在、