糖的分离纯化、结构鉴定及体外抗氧化活性研究_硕士学位论文

《糖的分离纯化、结构鉴定及体外抗氧化活性研究_硕士学位论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、安徽大学硕士学位论文糖的分离纯化、结构鉴定及体外抗氧化活性研究姓名：胡婷婷申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：王述声2010-04中文摘要本文以海藻裙带菜为原料、对裙带菜硫酸多糖的提取、分离纯化、理化性质、结构分析、体外抗氧化活性等方面进行了较为系统的研究，结果如下：1.本研究采用酸提醇沉的方法进行提取，先用稀盐酸(pH=2)浸泡，再在60℃中浸提6h,提取两次，加入90%乙醇，静置过夜，真空干燥，得裙带菜粗多糖。此条件下粗多糖得率为2.4%。粗多糖经链酶蛋白酶及Sevag法脱蛋白后，蛋

2、白脱除率88.5%,脱蛋白后的蛋白含量仅为1.51%。然后经DEAE-SephadexA-25离子交换柱分离，用0-2MNaCl溶液进行连续梯度洗脱，分部收集，苯酚-硫酸检测多糖含量，通过该实验来确定适宜的NaCl浓度，再用阶段洗脱方法进行大量制备样品，得到裙带菜硫酸多糖两种组分S1、S2，而后再经Superdex-200、SephacrylS-300柱层析两种方法进行纯度鉴定，苯酚硫酸法跟踪检测，所得峰形单一、狭窄对称，说明S1、S2已是均一化的多糖。2.裙带菜硫酸多糖（S1、S2）的性质研究。通过苯酚

3、硫酸法、硫酸咔唑法、考马斯亮兰法、凝胶过滤法、玫瑰红酸钠等方法对其理化性质进行分析测定。结果如下：总糖含量分别为40.54%、33.50%，糖醛酸含量为12.97%、9.98%，蛋白含量为1.39%、1.41%，分子量为150000、94620，硫酸根含量高达34.29%、33.99%，是高度硫酸化的多糖。本研究采用溶剂解离的方法对其做了脱硫酸化处理得脱硫酸化多糖（DS-1、DS-2），跟踪检测显示其硫酸根含量显著下降，硫酸根脱除率为82%。3.裙带菜硫酸多糖的结构研究。通过气相色谱法，红外光谱法、气质联

4、用等手段对S1、S2的结构进行了初步研究。结果如下：S1、S2均由鼠李糖（Rha）、半乳糖(Gal)、木糖（Xyl）、葡萄糖醛酸(GlcA)组成，但两者的摩尔比不同，其中鼠李糖(Rha)的含量最大，摩尔比分别达到51.44mol%、40.30mol%，其次还含有半乳糖和木糖，并含有少量葡萄糖醛酸,故可将S1、S2命名为裙带菜硫酸化异鼠李聚糖。红外光谱结果显示其具有硫酸基及羧基的特征吸收峰，这与理化性质所测的结果是一致的。GC-MS结果分析表明S1的末端基有鼠李糖、木糖、葡萄糖（葡萄糖醛酸经CMC还原得到）

5、，主体部分鼠李糖以1→2连接，并且在4-OI处有分支；木糖以1→4，且在2-O位有分支；半乳糖以1→3连接，且在6-O有分支。4.体外抗氧化活性研究表明：裙带菜硫酸多糖具有良好的清除超氧阴离子自2+由基、羟基自由基、有机自由基DPPH及对Fe的络合能力，并且硫酸根含量高的组份的抗氧化效率明显高于硫酸根含量低的组份。裙带菜硫酸多糖是一种抗氧化性功效较高的活性物质，硫酸根的含量与抗氧化效应关系密切。关键词：裙带菜；硫酸多糖；分离纯化；结构；抗氧化活性IIAbstractInthisdissertation,w

6、econductedaseriesofstudyonsulfatedpolysaccharide(S1andS2)whichwereisolatedandpurifiedfromUndariapinnitafida.Phsico-chemicalcharacteristicsandchemicalstructureofS1andS2weredetermined.Theantioxidantactivityinvitrowasexamined.Thefollowingresultswereachieved.

7、1.DriedalgaewereextractedinHCl(pH2)andtheresidueswereextractedwithHClat60℃forsixhour,fortwotimes.Theextractwereprecipitatedwiththreefoldofthevolumeof90%ethanol(v/v)andvacuum-driedtogetthepreliminarypolysaccharideproducts.Theyieldofthecrudepolysaccharideun

8、dertheseconditionswas2.4%.ProteinsfromthecrudepolysaccharidewereremovedbypronaseandSevagmethod.Theproteincontentofthecrudepolysaccharidewasonly1.51%afterremoving88.5%oftheprotein.ThenitwaspurifiedbyaDEAE-SephadexA-2