研究淡竹叶清热作用有效部位及化学成分

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1、研究淡竹叶清热作用有效部位及化学成分摘要:　目的研究淡竹叶清热作用有效部位及化学成分，为淡竹叶的进一步开发利用和质量标准的制定提供科学依据。方法采用体外抑菌实验筛选淡竹叶有效抑菌部位，并采用HPLC-MS法分析抑菌部位的化学成分。结果淡竹叶甲醇提取部位具有抑菌作用，根据液质联用图谱及文献，分析鉴定出淡竹叶甲醇提取部位中6个化学成分，分别为香草酸、香豆酸、牡荆苷、苜蓿素7-β-D-葡萄糖氧基黄酮、芦竹素或其同分异构体白茅素及苜蓿素。结论淡竹叶甲醇提取部位具有一定的抗菌活性，对各菌种的抑菌

2、效果有较大差异，这一部位可能与淡竹叶清热解毒功效相关。采用HPLC-MS法分析鉴定有效部位化学成分，保留了液相色谱与质谱兼具的微量、快速的优点,结合了前者的高分离效能与后者的准确性及选择性的特点,方法稳定可靠，为淡竹叶的进一步开发利用和质量标准的完善提供科学依据。关键词:中药鉴定淡竹叶抑菌实验液质联用　　淡竹叶为禾本科植物淡竹叶LophatherumgracileBrongn.的干燥茎叶［1］。始载于《本草纲目》，1977年以来的历版《中国药典》均有收载，具有清热除烦、利尿的功效。用于热病烦渴，

3、小便赤涩、淋痛，口舌生疮。淡竹叶为卫生部公布的药食两用中药之一，近年来多有制成保健凉茶［2］、淡竹叶酸奶［3］等。　　淡竹叶的有效成分物质基础研究一直较为薄弱，现有化学成分的研究显示淡竹叶主含黄酮、三萜类、多糖、酚性成分、氨基酸、有机酸及多种微量元素等［4～6］。依据现代医学理论，结合淡竹叶的中医临床功效，本实验对淡竹叶不同溶剂的提取部位进行了抑菌活性的研究，对淡竹叶清热有效物质基础进行初步筛选，并运用液质联用分析手段对所筛选的部位进行化学成分分析，为淡竹叶的进一步开发利用和质量标准的制定提供科

4、学依据。　　1仪器与材料　　1.1仪器手提式压力蒸气灭菌器（上海华线医用核子仪器有限公司）；移液枪（北京金花移液器厂）；HPLC－MS/MS液质联用仪（CC(B)44103；金葡菌CMCC(B)26003；乙链菌CMCC（B）32210；绿脓菌CMCC(B)24430。　　1.3药物营养琼脂（国药集团化学试剂有限公司，批号F20040304）；肉汤培养基（国药集团化学试剂有限公司，批号20060310）；血琼脂基础（国药集团化学试剂有限公司，批号20060228）；葡萄糖肉汤（国药集团化学试剂有

5、限公司，批号10010518）；香草酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号110776－200402）。牡荆苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号11876－200501）。淡竹叶采于江苏省宝华山，经南京中医药大学鉴定教研室吴启南教授鉴定为禾本科(Gramineae)植物淡竹叶LophatherumgracileBrongn.的干燥茎叶。　　2方法与结果　　2.1不同提取部位抑菌实验　　2.1.1提取部位制备　　淡竹叶置于多功能提取罐，60％乙醇回流提取5h，提取液减压回收溶剂得到淡竹叶总浸膏，

6、总浸膏与硅藻土拌匀，分别加入石油醚、二氯甲烷、甲醇、水逐级超声提取，减压回收溶剂，得石油醚提取部位、二氯甲烷提取部位、甲醇提取部位和水提取部位，作为供试品。　　2.1.2不同提取部位抑菌实验取上述供试品各1g，加入蒸馏水1ml，超声溶解。在超净工作台上将灭菌后的培养基倒入无菌培养皿中，待冷却凝固后，用无菌移液管吸取1∶1000稀释的大肠、金葡、绿脓菌液加到平皿上，用刮铲将菌液涂匀，再用打孔器在培养基上打孔，打孔后每个孔内注入25μl药液，37℃培养24h，观察实验结果。结果见表1。表1淡竹

7、叶不同提取部位抑菌实验结果（略）　从药敏实验中发现，淡竹叶的石油醚、二氯甲烷及水提取部位对该3种细菌抑菌效果为阴性，甲醇提取部位对该3种细菌抑菌效果为阳性，故对甲醇提取部位的抑菌效果做进一步的实验。　2.2甲醇提取部位抑菌实验　　2.2.1对金葡菌、大肠杆菌、绿脓杆菌的抑菌实验将甲醇提取部位的浸膏配成相当于生药浓度为40，20，10，5，2.5，1.25，0.625gml-1。同2.1项下方法实验，制作培养基，将菌液涂匀于培养基上，打孔，分别注入20μl的药液，37℃培养，24h后观察抑菌

8、结果。结果见表2。表2不同浓度甲醇提取部位对3菌种抑菌圈直径平均值（略）　　　从表2中我们可以看出淡竹叶甲醇提取部位对金葡菌、绿脓杆菌和大肠杆菌均有一定的抑菌效果，抑菌效果依次为：绿脓杆菌>金葡菌>大肠杆菌，但都属于低敏的范围。　　2.2.2甲醇提取部位对乙链球菌的抑菌实验将提取部位按照浓度为10，5，2.5，1.25，0.625gml-1制作血平板，加入乙链球菌，放入37℃温箱培养24h，次日观察实验结果。结果显示，5gml-1以下均有乙链球菌生长，故淡竹叶甲醇提取部位对乙链的抑菌