黄芪汤中多糖的提取以及含量测定研究

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1、黄芪汤中多糖的提取以及含量测定研究ok3L药液),加入95%乙醇,使含醇量为70%,低温静置12h以上,以4000r/min,离心10min,弃去上清液,取沉淀用水溶解,再离心一次,取上清液浓缩至1:08,加入95%乙醇,使含醇量为80%,低温静置12h以上,抽滤,沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤,抽干,在恒温干燥箱50℃干燥,得多糖提取物[2]。2.1.2加水量的考察:称取黄芪汤药材14g共3份,第一份加8倍量水煎煮2次,每次25h,第二份加l2倍量水煎煮3次,每次1.5h,第三份加25倍量水煎煮2次,

2、每次2h,分别用4层纱布过滤,合并滤液,其余按“2.5”项下的操作,加水量为药材量12倍时,多糖提取率达9.7%.是较高的。2.1.3药液相对浓度的考察:称取黄芪汤药材42g(、.黄芪15g.白术9g、甘草6g),加12倍量的水煎煮3次,每次1.5h后,过滤浓缩,滤液平均分成三份,分别浓缩为1:0.8、1:1、1:1.2,分别加入95%乙醇,使含醇量为70%,其余按“2.5”项下的操作。结果多糖含量分别为12.2%、8.6%、4.3%,从实验结果可知,当药液相对浓度为1:0.8时,多糖提取率较高。2.

3、2多糖的含量测定研究2.21供试品溶液的制备:精密称取多糖提取物0.lg,置100mL容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成0.1mg/mL溶液,精密移取2.5mL稀释液,置50mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,振荡摇匀,备用[5

4、。2.2.2标准溶液的制备:精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品100.6mg,置100mL容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀。再精密吸取溶液10mL,置于100mL容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀,制成浓度为0.1006mg/mL的葡萄糖标准溶液。2

5、.2.3最大吸收波长的选择:精密移取葡萄糖标准溶液和供试品溶液各1.0mL,分别置10mL具塞试管中,加蒸馏水使成2.0mL,精密加入1.0mL苯酚溶液,摇匀,迅速加入5.0ml浓硫酸,静置5min后,置沸水浴中反应15min后取出并放至室温,于400-600mm范围内扫描。测得两者的最大吸收波长均为为490mm。2.2.4标准曲线的制备:分[1][2]下一页ok3L,置25mL具塞试管中[第一论文网专业提供代写论文和论文代写服务,加蒸馏水使成2.0mL,精密加入1.0mL苯酚溶液,摇匀,迅速加入5.

6、0mL浓硫酸,静置5min后,置沸水浴中反应15min后取出并放至室温,于490mm处测定吸光度(A)。以吸光度A对浓度C进行线性回归,计算回归方程A=60.047C-0.0006.r=0.9997。浓度C在0.0012一0.0013mg/mL范围内线性关系良好。2.2.5精密度试验:精密移取对照品溶液1.0mL,按“2.2.4”项下操作,测定吸光度,连续测定6次,吸光度的RSD为0.08%,表明仪器精密度良好。2.2.6稳定性试验:精密移取供试液1.0mL按“2.2.4”项方法操作,测定吸光度。每隔

7、30min测定一次,连续2.5h考察其稳定性,吸光度的RSD为1.6%,结果表明样品溶液在2.5h内显色稳定。2.2.7重复性试验:称取黄芪汤剂的药材共14g,按“2.1.1”项下方法操作,得多糖提取物1.8829g,精密称取多糖提取物0.1g,共6份,按“2.2.1”项下操作配制供试品溶液,分别精密移取供试品溶液1.0mL,按“2.2.4”项下方法测定,并计算多糖提取物中多糖相对含量,平均为92.7%,再换算成黄芪汤剂中多糖的含量,平均为12.4%,RSD为2.6%,结果表明该方法重复性良好。2.2

8、.8加样回收试验:精密称取同一多糖提取物0.05g,共6份,分别精密加入葡萄糖标准品适量,其余按“2.2.7”项下操作,计算多糖回收率,结果见表。表1回收率试验测定结果2.2.9祥品含量测定称取黄芪汤剂的药材14g,共6份,按“2.1.1”项下方法操作,得多糖提取物,精密称取多糖提取物0.1g,按“2.2.1”项下操作配制供试品溶液,分别精密移取供试品溶液1.0mL,按“2.2.4”项下方法测定,求得多糖的含量,实验结果见表2:表2黄芪汤的多糖含量测定结果3讨论黄芪多糖属于极性大分子化合物,主要由D-

9、葡萄糖、D-半乳糖和L-阿拉伯糖组成。研究发现,多糖的生物活性与分子量、溶解度、粘度、一级结构和高级结构有关,因此多糖提取时应根据其有效成份的不同来设计工[第一论文网专业提供代写论文和论文代写服务,艺路线。试验中同时比较测定了黄芪、白术、甘草各单味药材中多糖的含量,结果显示黄芪汤中多糖的平均含量为13.1%,全方汤剂的多糖含量略高于黄芪、白术、甘草单药汤剂的多糖含量之和。有关文献报道[5]用不同浓度的汤剂进行醇沉时,浓度太高或太低都会实验结果,本实验孝察