角质形成细胞抗原提呈功能分析

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1、-第四军医大学硕士学位论文参考文献······························································································50附录····································································································60个人简历及研究成果······························································

2、·················61致谢····································································································62----第四军医大学硕士学位论文缩略语表缩略词英文全称中文全称APCAntigen-presentingcell抗原提呈细胞BcellBlymphocytesB淋巴细胞BCRBcellreceptorB细胞受体BSABullserumalbumin牛血清蛋白CDClusterofdifferentiation白细胞分化抗原DCs

3、Dendriticcells树突状细胞Co-IPCo-Immunoprecipitation免疫共沉淀dday天EDTAEthyleneDiamineTetraaceticAcid乙二胺四乙酸ElispotEnzymelinkedimmunospotassay酶联免疫斑点测定法hhour小时HaCaT细胞Humankeratinocytecellline人永生化角质形成细胞系ICAM-1Intercellularcelladhesionmolecule-1细胞间黏附分子-1IFN-γInterferon-γγ-干扰素ILInterleukin白介素ILCInnately

4、mphoidcell固有淋巴样细胞KCsKeratinocytes角质形成细胞K17Keratin17角蛋白17-1-----第四军医大学硕士学位论文MΦMacrophage巨噬细胞minminute分钟MHCMajorhistocompatibilitycomplex主要组织相容性复合体PBMCPeripheralbloodmononuclearcells外周血单个核细胞PRRPatternrecognitionreceptor模式识别受体ssecond秒TAPTransporterassociatedwithantigen-processing抗原加工相关转运物Tc

5、ellTlymphocytesT淋巴细胞TCRTcellreceptorT细胞受体TregRegulatoryTcells调节性T细胞-2-----第四军医大学硕士学位论文角质形成细胞抗原提呈功能研究硕士研究生：郝军峰导师：王刚教授第四军医大学西京皮肤医院，西安710032中文摘要角质形成细胞（KCs）为皮肤表皮的主要组成细胞，是机体直接与外界环境接触，最先接触外来抗原的细胞。研究发现，KCs不仅形成机体的物理屏障，同时具有重要的免疫功能。KCs在一些疾病的状态下或者直接受到干扰素-γ（IFN-γ）等细胞因子的刺激后，可以表达抗原提呈相关分子如主要组织相容性复合体-II

6、（MHC-II）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）等，同时主要组织相容性复合体-I（MHC-I）也会较刺激前增高。上述改变使得KCs具备了发挥抗原提呈功能的先决条件。以往的研究仅仅证明活化后的KCs具备了发挥抗原提呈的条件，如表达一些专职抗原提呈细胞（professionalAPC）所特有的分子，或者利用动物实验间接证明了KCs发挥了抗原提呈的功能，但均未能拿出有说服力的直接证据。本研究通过利用流式细胞学、免疫共沉淀、质谱鉴定、Elispot等实验直接证明了KCs在活化状态下可以作为APC发挥抗原提呈功能。目的：证明KCs在特定条件下可以发挥抗原提呈功能，鉴定KCs提

7、呈抗原肽的序列及其MHC限制性。方法：1.刺激HaCaT细胞表达抗原提呈相关分子：用细胞因子IFN-γ刺激人永生化角质形成细胞系（HaCaT细胞）致使其活化；2.质谱鉴定抗原肽：分别利用MHC-I、MHC-II单克隆抗体对活化后HaCaT细胞胞浆及包膜表面的主要组织相容性复合体--3-----第四军医大学硕士学位论文肽段复合物（MHC-peptidecomplex）进行免疫共沉淀（Co-IP），用PH3.0的酸液对共沉淀下来的MHC-肽段复合物进行解离，后经超滤管离心将两者分离，通过银染及蛋白印迹（Westernblot）来验证免疫共沉淀