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1、叶片荧光测量实验报告1.实验目的2.实验方法利用PAM100,荧光成像系统测量叶绿素荧光3.实验原理及一些参数的意义荧光的变化反映光合与热耗散的变化。光化学淬灭（PhotochemicalQuenching）:由于光合作用引起的荧光下降，反映了光合活性的高低。qP=(Fm’-Fs)/Fv’=1-(Fs-Fo’)/(Fm’-Fo’)（基于“沼泽模型”）qL=(Fm’-F)/(Fm’-Fo’)·Fo’/F=qP·Fo’/F（基于“湖泊模型”）非光化学淬灭（Non-PhotochemicalQuenching）:由于热耗散引起的荧光下降。qN=(Fv-Fv’)/Fv=1-(Fm’-Fo’)/(Fm
2、-Fo)NPQ=(Fm-Fm’)/Fm’=Fm/Fm’-1，不需测定Fo’，适合野外调查qN或NPQ反映了植物耗散过剩光能转化为热的能力，反映了植物的光保护能力。Fv/Fm=(Fm-Fo)/Fm:PSII的最大量子效率，反映植物潜在最大光合能力，高等植物一般在0.8－0.84之间，当植物受到胁迫（Stress）时，Fv/Fm显著下降。ΦPSII=Yield=(Fm’-Fs)/Fm’=ΔF/Fm’=qP·Fv’/Fm’:任一光照状态下PSII的实际量子产量（实际光合能力、实际光合效率）不需暗适应，不需测定Fo’，适合野外调查。Y(NPQ)=1-Y(II)-1/(NPQ+1+qL(Fm/Fo-1
3、))：调节性能量耗散，PSII处调节性能量耗散的量子产量。若Y(NPQ)较高，一方面表明植物接受的光强过剩，另一方面则说明植物仍可以通过调节（如将过剩光能耗散为热）来保护自身。Y（NPQ）是光保护的重要指标。Y(NO)=1/(NPQ+1+qL(Fm/Fo-1))：非调节性能量耗散PSII处非调节性能量耗散的量子产量。若Y(NO)较高，则表明光化学能量转换和保护性的调节机制（如热耗散）不足以将植物吸收的光能完全消耗掉。也就是说，入射光强超过了植物能接受的程度。这时，植物可能已经受到损伤，或者（尽管还未受到损伤）继续照光的话植物将要受到损伤。Y（NO）是光损伤的重要指标。P：光合速率，即相对电子
4、传递速率rETRPm:最大光合速率，即最大相对电子传递速率rETRmaxa：初始斜率，反映了光能的利用效率b：光抑制参数Ik=Pm/a：半饱和光强，反映了样品对强光的耐受能力。AL:作用光ML:检测光SP/P+Fsp:饱和脉冲光注：光化学淬灭可以被一种短饱和脉冲光（0.2－1s）暂时完全抑制，剩余的荧光淬灭就是非光化学淬灭。（叶绿素a荧光理论及其应用张西斌）1.实验步骤4.1Dual-Pam100的操作步骤4.1.1参数调整4.1.1.1打开Dual-Pam100的界面，更改下面参数：Mode:fluo+P700;Meanslight:fiuo-int=10P700-int=5Actligh
5、t:Act.red.right-int=17Farredlight=5Width=40sSatpulse:P+F+sp--int=10;4.1.1.2点Light，进入界面，再点edit进行下面参数的编辑：Intense1，4,8,12,14,16,18,19,20Time2,2,2,2,2,2,2,2,2,之后的全部设置为0；1.1.2进入测定界面开始测定1.1.2.1回到slowkinetics界面点击F0，Fm(确定Y（II）值0.8-0.85之间)→点Bal(平衡光系统I，II)→点Pm(待回复灰色)→点start(过4s后)→点Al作用光（过3min半）→点P+F+sp饱和光（此时
6、一般会观察到红色曲线达到平衡）→过30s左右关掉Al(曲线会下降)→再过1min左右（曲线平稳）→点stop→在当前界面点击曲线保存按钮保存曲线。4.1.2.2回到lightcurve界面点Bal→点start（出现对话框newF0,FmandPm-determindtion…点NO）→等曲线绘成后点report保存数据→数据保存后手动清空当前界面数据。4.2荧光成像系统的操作先打开荧光成像仪再打开电脑对应系统→将叶片按要求放在叶室；4.2.1进入setting界面如下调整参数：Meas.Light-int=1Frequence=1;Act.light-int=19widths=0;Imag
7、eCorrection=MAXI;ImageTransformation=Rotate180°Battery=16.3V;Gain=1Damping=2Sat.Pulse-int=10No=1Intervals=30;SlowInduction-Delays=40clocks=20Durations=315;Absorptivity-RedGain=30redIntensity=3NIRIntensity=2
