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1、滋阴补肾丸对广防己减毒作用的初步探究ok3inarystudyonreducingpoisonouseffectsofZiyinBushenPilltoAristolochiafangchi.MethodsAbsorptionofAristolochhiaacidAinthemingleddecoctionofAristolochiafangchiandZiyinBushenPillbyHPLC,andthechangeofAristolochiaacidAarkedlydecreasedafterZiyinBushenPillarkedlyde
2、creasedAristolochhiaacidAcontentofAristolochiafangchi.Keym×250mm),柱号为E:1417177;流速:1mL/min;柱温:室温;检测波长:250nm;进样量:10μL;流动相:乙腈-(水+冰醋酸)=48∶52,其中,水-冰醋酸=62.5∶1。理论塔板数不低于2000。2方法与结果2.1标准溶液的制备称取AA-Ⅰ对照品7mg,置于50mL量瓶中,加无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为0.14mg/mL的对照品储备液。精密量取对照品储备液2.0mL于10mL量瓶中,用无水乙醇定容至
3、刻度,摇匀,即得浓度为0.028mg/mL的AA-Ⅰ对照品溶液。2.2供试液的制备2.2.1广防己样品溶液的制备精密称取广防己样品0.6g,置于200mL烧杯中,加120mL自来水,煎煮30min,过滤,收集滤液,残渣加80mL自来水,煎煮30min,过滤,收集滤液,合并两次滤液,置于水浴上,浓缩至干。用适量的无水乙醇溶解并完全转移至10mL的量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀。放入冰箱冷藏,静置过夜。抽取上清液,过滤,弃去初滤液,收集续滤液,放入1mL塑料离心管中,作为供试液1。2.2.2广防己与滋阴补肾丸供试液的制备分别取广防己样品、滋阴补肾丸粉
4、末少许,各精密称取0.6g,置于200mL烧杯中,混合两种药物,加入120mL自来水,按“2.2.1”项下制备广防己样品溶液的方法进行操作,其制备液作为供试液2。2.3马兜铃酸A对照品的定性分析分别吸取供试液1和对照品溶液,注入液相色谱仪,按“1.4”项下色谱条件,测绘其色谱图。色谱图见图1。2.4标准曲线的制备精密吸取对照品储备液1、2、3、4、5、6mL,分别置10mL的量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度。按“1.4”项下的色谱条件,依次进样测定,测得AA-Ⅰ的峰面积。以AA-Ⅰ的进样量(μg)为横坐标,以对应的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。由标准
5、曲线可知,在0.08~0.40μg之间,进样量与峰面积之间呈良好的线性关系,回归方程为:Y=1.7×105X+5248,r=0.9999。2.5精密度试验精密吸取对照品溶液10μL,按“1.4”项下的色谱条件,注入液相色谱仪,测定对照品溶液的峰面积,平行测定5次。结果RSD=0.45%,表明精密度良好。2.6稳定性试验按“1.4”项下色谱条件,精密吸取10μL供试液1,注入液相色谱仪,测定,然后于2、4、8、12、24h各测定1次,结果RSD=0.10%,表明供试品溶液在24h内测定结果稳定。2.7重复性试验取广防己样品0.6g,精密称定,共称取
6、5份,照“2.2.1”项下操作,制成供试品溶液。在“1.4”项下的色谱条件下,分别精密吸取供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,计算AA-Ⅰ的质量。结果RSD=0.78%,表明重复性良好。2.8加样回收率试验取0.2mL供试液1,用无水乙醇定容为1mL,作为供试液3。取0.2mL供试液1,加入标准溶液0.15mL,用无水乙醇定容为1mL,作为供试液4。取标准溶液0.15mL,用无水乙醇定容为1mL,作为供试液5。取以上各供试液10μL,按“1.4”项下色谱条件测定,结果回收率为(99.5±0.5)%,RSD=0.5%。2.9马兜铃酸A对照品
7、的定量分析分别取供试液1、2,按“1.4”项下色谱条件测定并计算各样品中AA-Ⅰ的含量。结果表明,广防己与滋阴补肾丸共煎后,AA-Ⅰ含量降低了30.04%,可见,滋阴补肾丸可以明显降低广防己中AA-Ⅰ的含量。见图2、表1。表1广防己与滋阴补肾丸共煎后的AA-I含量比较(略)3讨论国内外学者现已公认,广防己的肾毒性与其所含主要成分马兜铃酸有关,而其中马兜铃酸A为主要毒性成分[1],且含量较大,故将马兜铃酸A作为测试指标。在提取方法上为了尽量符合临床实际,我们选用了加热水提的方法,提取次数为2次。广防己祛风止痛、清热利水,主治湿热身痛、风湿痹痛、下肢
8、水肿、小便不利等症[2]。湿热之邪极易伤阴,同时广防己利水亦易伤阴。故需配伍养阴药,使邪正兼顾。肾阴为一身阴津之根,滋阴补肾丸为中医滋补
