微生物纯种分离与活菌计数法小论文

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1、综合性（设计性）实验实验报告实验名称:姓名:指导教师:专业:实验班级:实验时间:实验地点:成绩:微生物纯种分离与活菌计数法生物科学微生物实验室微生物纯种分离与活菌计数法一.实验目的1.了解从土壤中分离和纯化微生物的基本原理2.掌握常用的微生物分离和纯化的方法（涂布平板法、平板划线分离法、稀释倒平板法）3.学;g通过平板菌落进行活菌技术的原理与方法二.实验原理自然界中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养。这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。常

2、用的方法有涂布平板法、平板划线分离法、稀释倒平板法、梯度稀释法等，最终使单个微生物细胞在固体培养基上生长而形成单个菌落，从而获得若干个细菌的纯培养。为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其它菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物i，然后分离纯化该微生物，直至得到纯菌株。三.实验方法1.梯度稀释法2.涂布平板法1.平板划线分离法2.稀释倒平板法一.主要实验仪器与材料1.高压蒸汽火菌锅、恒温电热干燥箱、生化培养箱2.器材：酒精灯，电炉，接种环，

3、无菌试管，三角瓶，记号笔，天平，火柴，无菌培养皿，无菌移液管，玻璃涂棒，试管架、无菌生理盐水，盛无菌水并带冇玻璃珠的三角烧瓶等。二.实验步骤（一）样品微生物的分离祥品的称量：准确称取祥品10g样品的预处理：将称取好的样品10g，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，摇床约20min，使样品与水充分混合，将菌分散。样品的稀释：梯度稀释法取7—8支火菌空试管，用一支10ml无菌吸管分别加入9ml无菌水。用一支lml无菌移液管取从预处理好的样品悬液中吸取1ml注入盛存9ml无菌水中，充分混匀，然后按照以上发法依次稀释成10-2、10-3、……10~1

4、0'O（二）样品微生物的纯化（1）涂布平板法：用移液枪分别取适合稀释度液lml于倒好的培养棊且凝固好的培养皿屮，用无菌涂布棒将稀释液充分涂开，待干。每个稀释梯度一般2-3个平行。（2）平板划线分离法：用移液管分别取适合稀释度液（一般取3个梯度）于倒好培养棊且凝固好的培养皿上按“Z”形划线。（3）梯度稀释法：用移液管分别取不于同浓度的稀释液，将其均匀分布于平板培养棊上。（4）稀释倒平板法：分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至45°C左右的琼脂培养棊混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿屮，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出出菌落。（

5、三）样品微生物的培养培养条件：细菌一般是32.5±2.5°C培养时间：细菌2天（四）样品微生物的计数首先选取平均菌落数在30-300个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数。一.实验记荥：适于计数的平板上的菌落数在30-300之间，细菌稀释度为：104105106放线菌稀释度为：103104105真菌稀释度为：102103104计数时每隔24h统计菌落数，菌落特征包括：形状大小颜色隆起程度等。一.实验结果与讨论制备培养棊时，加热溶解琼脂时要不断地搅拌，防止液体剧烈沸腾溢出。接种操作时尽

6、量避免外界细菌的渗入，使得培养棊屮菌落参杂Y杂菌划线时应严格按照老师的要求，熟练操作，尽量划线均匀二.实验结果：纯种分离是微生物实验常用的技术，在实验屮常常被我们使用。计数法分为直接计数法和间接计数法。直接计算法常用显微镜技术，但是不能区分死菌和活菌，难以计数微小的细菌。间接计数法常用的是稀释涂布平板计数，稀释度很重要，一般选用三个稀释度屮的第二个稀释度作为最佳，因为平均菌落数为最好。