如何选择hplc溶剂

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1、如何选择HPLC溶剂斯百全化学（上海）有限公司400-856-0488+86-21-64220086高效液相色谱法（HPLC）20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术目前已成为生物化学、医学研究、药物临床、化学化工、食品卫生、环保检测等领域最常用的化学分离分析手段1、定性分析2、定量分析（用于化合物含量及纯度分析）简单来讲，使用HPLC分析的主要目的在于分离一个混合物中各个组分，并定量出各组分在混合物中所占的比重。工作过程：通过高压泵，连续的将流动相按照一定流速流过柱子；通过进样器，

2、注入样品混合物。由于混合物中各组分性质不同，因而它们在柱內移动速度不同而逐渐分离。通过检测器检测，得到组分的电信号并进行放大；记录仪将放大的电信号以图形形式记录下来，由此得到液相色谱图。高效液相色谱法（HPLC）分离原理：溶于流动相（mobilephase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationaryphase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滯留时间不同，从而先后从固定相中流出在色谱分析中，如何选择最佳的色谱条件以实现最理想分离，是色谱工作者的重

3、要工作，也是用计算机实现HPLC分析方法建立和优化的任务之一高效液相色谱法（HPLC）HPLC分离指标分离度：无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其它峰、內标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。不一定是两种待测物的分离度，而有可能是它们与其最接近的干扰物的分离度。应当尽量保证>1.5，>2.0比较理想，再大也可以，但沒太大意义。峰型：窄而对称的峰最为赏心悦目，这也是保证良好分离度的因素，同时有利于定量的准确和良好的重现。（拖尾引子：通过计算5%峰高处峰宽与峰顶点至前沿的距离比来评价峰形的参数

4、。）塔板数：和半峰宽相关。半峰宽越小，塔板数越大，峰就越窄，分离越好。究竟要多大，应以良好的分离为准。保留时间：要求的是重现性，是色谱定性的依据，同时也決定了分析时间RSD(标准偏差）<2正确选择流动相直接影响检测结果和仪器的损耗！高效液相色谱法（HPLC）液相色谱系统的很多问题都能在谱图上反映出來，其中一些问题可以通过改变设备参数得到解決，而其它的问题必须通过修改操作程序来解決。谱图问题与流动相或溶剂有关的原因解决办法峰拖尾流动相pH选择错误调整pH值。(对于碱性化合物，低pH值更有利于得到对称峰)

5、峰前延样品溶剂选择不恰当使用合适的溶剂峰分叉样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂鬼峰流动相问题a.检查流动相是否纯净b.使用流动相作为样品溶剂c.减少进样体积保留时间波动/不断变化流动相组分变化选择不恰当防止变化（蒸发、反应等）/a.更换合适的流动相b.选择合适的混合流动相基线漂移流动相污染、变质或由低品质溶剂配成/不均匀/配比不当或流速变化检查流动相的组成,使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂/使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂,流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气/更改配比或流速,定期检查

6、流动相组成及流速基线噪音（规则的）流动相混合不完全用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂基线噪音（不规则的）流动相污染、变质或由低质溶剂配成/流动相各溶剂不相溶检查流动相的组成/选择互溶的流动相宽峰流动相组成变化重新制备新的流动相分离度降低流动相污染或变质（引起保留时间变化）重新配置流动相对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键！HPLC溶剂的要求（1）高纯度，溶剂与固定相不互溶，并能保持色谱柱的稳定性由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度要求也高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”

7、）。（2）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性，即足够的溶解能力溶剂的极性要与待测样品相匹配，如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响纯化分离，且会使柱子恶化。(3）溶剂要与检测器匹配对于UV-Vis，所用流动相在检测波长下应沒有吸收或吸收很小（4）化学稳定性好不能选与样品发生反应或聚合的溶剂(5）低粘度，沸点适中减小溶质的传质阻力，降低柱压，利于提高柱效。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙腈等；粘度过低的溶剂也不宜采用，如戊烷、乙醚等，易在色谱柱或检测器內形成气泡，影响分离HPLC溶剂

8、的要求HPLC溶剂关键性能UV吸收性HPLC级试剂是用特殊方法生产的含有最少的颗粒和最低的紫外吸收物质，除去具有吸收UV的杂质，在规定的波长上吸光度限制在规定值以內。梯度洗脱性能在一个分析周期內程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度①溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能作为梯度洗脱的流动相。当有机溶剂和缓冲液混合时，可能析出盐的晶体