基因工程应用与克隆

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1、[2005年天津理综卷31（1）]限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—GGATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。用上述两种酶分别切割质粒和含有目的基因的DNA。1、请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。[2005年天津理综卷31（1）]限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—GGATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。用上述两种酶分别切割质粒和含有目的基因的DNA。2、请画出目的基

2、因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。3、在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？可以连接。因为由两种限制性内切酶切割后所形成的黏性末端是相同的(或“是可以互补的”)（2011年浙江卷）6、ada（酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是A.每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒B.每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点C.每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个adaD.每个人的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子答案：C下图四种质粒含有E1和

3、E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。（2011上海生命科学卷57基因工程中使用的限制酶,其特点是：特异性地识别和切割DNA将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（可多选）A．X－1B．X－2C．X－3D．X－4答案：ABC例1.下面哪项不具有限制酶识别序列的特征（）A．GAATTCB．GGGGCCCCC．CTGCAGD．CTAAATCCTTAAGCCCCGGGGGACGTCGATTTAG1.限制酶的特点例2.限制酶HindⅢ酶切

4、DNA的识别序列是AAGCTT，限制酶HpaⅡ酶切DNA的识别序列是CCGG。假定DNA分子中A、T、G、C所含的比例相等，那么，限制酶HindⅢ酶切割双链DNA的概率是，酶切位点间的平均距离约kb（千碱基）；限制酶HpaⅡ酶切割双链DNA的概率是，酶切位点间的平均距离约kb。解析：因为限制酶识别序列具有回文对称序列的特点，这两个序列在相应的互补链上又会呈现，因此我们只需考虑DNA的一条链即可。六碱基长HindⅢ识别序列AAGCTT出现的概率是（1/4）6或1/4096，因此HindⅢ酶切位点之间的平均距离大约为4kb。同样的道理，4碱基

5、长的HpaⅡ酶识别序列CCGG出现的概率是（1/4）4或1/256，因此HpaⅡ酶切位点的平均距离大约为0.25kb。例3.下列所示的黏性末端是由几种限制性内切酶作用产生的（）A．1种B．2种C．3种D．4种2．黏性末端与限制酶类型的关系4．基因诊断一对等位基因经某种限制性内切酶切割后形成的DNA片段长度存在差异，凝胶电泳分离限制酶切割的DNA片段，与探针杂交后可显示出不同的带谱(如图I所示)。根据该特性，就能将它作为标记定位在基因组的某—位置上。现有一对夫妇生了四个儿女，其中I号性状表现特殊(如图Ⅱ)，由此可推知四个儿女的基因型(用D、

6、d表示一对等位基因)正确的是A．1号为XdXdB．2号为XDYC．3号为DdD．4号为DD或Dd基因工程的应用基因工程与遗传育种杂交育种的的缺点：所需时间长，远缘亲本难以杂交基因工程：克服远缘难以杂交的障碍，实现种间遗传物质的交换基因工程的应用基因工程与疾病治疗基因工程药物基因治疗基因工程的应用基因工程与生态环境保护可降解生物塑料超级细菌第二章克隆技术受精卵胚胎幼儿老人精子卵细胞4.营养生殖红富士国光zhēn砧木接穗扦插压条繁殖的类型:（一）有性繁殖（二）无性繁殖受精卵(合子)胚胎个体精子卵细胞特点:具备了双亲的遗传特性具有更强的生活能力

7、和变异性定义:母体新个体特点:其个体保持了亲本的遗传性状，可以产生很多后代应用：——克隆技术原因：由于细胞核具有基因组全套遗传信息第一节什么是克隆只要不通过两个分子、两个细胞或两个个体的结合，只由一个模板分子、母细胞或母本直接形成新一代分子、细胞或个体，就是无性繁殖，即克隆。无性繁殖系——克隆一、克隆的层次：1、在分子水平上2、在细胞水平上3、在个体水平上目的基因的复制、分离过程单克隆抗体：利用动物细胞融合技术将骨髓瘤细胞和能产生抗体的B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞，培养，筛选到杂交瘤细胞系。不通过两性细胞的结合，从一个单一的细胞繁殖出生物

8、个体。即细胞个体——基因克隆——制备单克隆抗体——繁殖出生物个体单克隆抗体制备过程注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养杂交瘤细胞系细胞水平的克隆实例植物组