rna干扰的研究

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1、RNA干扰的研究摘要：RNA干扰足指巾dsRNA介导的特异靶序列mRNA基冈沉默的现象，白1998年发现以來，在分子生物学研究方而己取得秉大进展。特别足在哺乳动物中的应用研究，构建稳定表达URNA载体，有效筛选siRNA靶序列方而取得了突破，而且在难因功能研究，遗传病的难因治疗，胞内抗病毒免疫，机体水平应用研究方面也杏了重人进展。关键词：RNAT扰；基因沉默；靶序列；引物；发卡结构TheresearchofRNAinterferenceHenanZhang(07BiologicalClass，MedicalCollegeofSun-yats

2、enuniversity)Abstract：RNAinterferencemeansthephenomenonofspecificmRNAgenesilencecausedbytheinterpositionofdsRNA.Sincediscoveredin1998,RNAihasgotgreatprogressonBiologyresearch.Peoplehavegotbreakthroughespeciallyontheapplianceresearchofmammals，thebuiltofthestablesiRNAcarrier

3、andtheefficientselectionofsiRNAtargetsequence.Andpeoplealsogotgreatprogressongenefunctionresearch，genetherapyofheredopathia，endocellanti-viralimmunityandapplianceresearchofbodylevel.Keywords:RNAinterference;genesilence;targetsequence；prime；hairpinRNAT扰(RNAi)真正被确定是Fire于1998

4、年在秀丽线虫中发现了转录后的基因沉默［1］，并且引起了分子生物学家和遗传学家等的很大兴趣。RNA十扰广泛存4:于各种生物中包括：从真菌到枬物，从无脊椎动物到哺乳类动物等几乎所有真核生物。并很快从对线虫的研究扩展到了对锥虫、果蝇、脊椎动物以及医学肿瘤［2］、微生物遗传病基因治疗、基因功能研究［5］等多个领域。1.RNA干扰的发现历史:最初在1990年，Jorgensen等［6］在研究怎样增多矮牵牛花的颜色时，就观察到一种当时无法解释的现象：希望通过导入紫色色素合成酶基因增加色素基因拷贝，从而得到紫色加深的矮牵牛花；仴结果确是，一些矮牵卞花的

5、紫色不但没有加深，反倒使开出的花呈部分或全部的白色。进一步的研究说明，这些导入的基因非但没得到表达，并且使矮牵中花自身的基因表达受到了抑制。作者当吋称之为共抑制(cosuppression)o到了1994年，Cogoni［7］等发现:向链孢霉菌中转入albinol(al-1)或albino3(al-3)基因后，内源性al-1或al-3基因表达水乎人人降低。当时将这种真苘屮的基因表达抑制现象叫做消除作川(quelling)o1995年Guo等［8］在研究秀丽线虫胚胎的第一次卵裂时发现，给它注射par-1基因的反义KNA可以阻断par-1的转录

6、和翻译，但是对照组中的正义RNA也得ill了样的结果。1998年Fire等［9］用RNA聚合酶在体外转录出了与秀丽线虫发竹等相关基因的正、反以RNA，并且纯化之后导入秀丽线虫，发现导入的RNA可以抑制基因的表达，并且dsRNA比ssRNA效果更好，从此将这种现象命名为RNA干扰(RNAi)。并JI发现，dsRNA经过秀丽线虫肠道注射时，所产生的RXAi讨以4:细胞间传递并传至子代。2.RNA干扰的基本原理RNA干扰(RNAi)指发生在动植物屮由dsRNA指异的mRNA序列特异性降解的现象，它分为启始阶段和效应阶段两个阶段。对于哺乳动物的细胞

7、，启始阶段中细胞内RNasdlldicer从dsRXA链两端进行切割，产生19-23个核昔酸的dsRNA片段,即小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),其3’端含有2—3个核苷酸突出端，5’端磷酸化。效应阶段为：siKNA进入RNA诱导的沉寂复合物(RISC),并且RISC复合物是蛋白质-RNA效应子核酸酶g合体。siRXA进人后，由于位置构象原因而被解链成正义链和反义链，由反义链引异RISC和与之互补的靶RNA杂交，一只与靶RNA杂交RTSC上的核酸酶以则一定的闽隔，在被识别的2个核昔酸序列的中部进行切割，在两

8、端规律性地产牛.21个核苷酸的RNA片段［1°］。RNAi属于进化上非常保守的适应性应答机制，它能介导细胞对内源寄生性核酸和外源病原体核酸产生抗性，调节蛋白编码基因的表达。RNA