rrsv的分离鉴定及其对marc-145细胞型朊蛋白表达影响研究

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1、Secrecy：No．ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationIsolation，IdentificationofPRRSVandtheInfluenceofPRRSVInfectionontheExpressionofPrPcinMarc．．145CellsM．S．Candidate：ShiChongxuSupervisor：ProfessorZhangjieMajor：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty：AnimalComorbiditie

2、sandVeterinaryPublicHealthMay2015万方数据独创性l声明本人声硐所整交的论文是我个人在导师指导下进行晌研究上作及取耨的研究成果。尽我所知，跞了文中特别加以标注和致谢的地方外，沦烹中不包禽其他人已经发表或撰写过的剐究成聚，也不包含为获得巾I孙梃业科学院或戴它教育机构的学位或证书1iii健用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的狂何贡献均已在论文中作了明确妁说阱挣表示了谢意。研究：氇呷哆卿J=a啦“月毒铜关于论文使用授权的声明本人完全彳寤；ji!中国农业科学院秆关保留、使_；『玎掌位论文的规定，j；ilJ：r

3、I，圈农业科学院有权保鹧送交论文的复印件和磁盘，允许论文被燕筒剽借阅，可以来州影印、稚印或扫描苓复制手毂保存、汇编学证论熏：。同意中幽农业科学院呵以用不同育筑在习(同媒体上漩袭、传播学位c仑文的仝绺缄郎分内容。僦蝼名：氇呷堪叭a∥年r月a霸孙芗叫问：渊鼻i如邓，万方数据中匿表业科学院醭士学位论文评嬲人、答辩委员会签名表，论文题魁iⅨ墩sV豹努离簦定及筵对Ma撵，l霉5细貔燮甄豢魏袭达瓣响鳓磷究i久裔共懑瘸及蛰

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9、=辫躐罐笼煎稼巍攥三矮会浚叠万方数据摘要猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弓I起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍以及仔猪呼吸道症状和高死亡率为特征的传染病。PRRS自1987年首次在美国报道后，现己几乎遍及世界各地，并成为危害养猪业最严重的传染病之一。与其它囊膜RNA病毒一样，PRRSV具有高度的变异性，不同毒株序列之间存在不同程度的差异，而欧洲型和美洲型毒株之间的差异则更大

10、。本研究从2008年青海某猪场出现高热和呼吸困难等临床症状的发病猪场采集肺脏和血液等样品，在Marc．145细胞上进行病毒培养。将出现特征病变的细胞收集后继续培养并收集病毒。利用RT-PCR、免疫荧光、电镜等方法对分离的病毒进行鉴定，检测结果表明分离的病毒为美洲型PRRSV，将其命名为QH08株。针对PRRSVQH08株设计7对特异性引物扩增全长基因组，对扩增出的片段进行拼接，结果显示PRRSVQH08株基因组全长为15320bp。通过序列比对发现，QH08PRRSV与高致病性PRRSV(HP．PRRSV)代表株JXAl的全长基因组核苷酸

11、相似性最高，其同源性为98％，并且在NSP区域有两处不连续的90个核昔酸的缺失，所以分离的QH08株属于美洲型HP．PRRSV。为研究QH08毒株对Marc．145细胞的致病性以及毒力强弱等特性，本实验以QH08毒株、海利和诺倍威CH．1R经典毒株、GW-HR毒株在Marc．145细胞上进行传代培养，并对其传代毒株的TCID50高低以及CPE出现的时间进行比较分析。研究结果表明：(1)不同PRRSV株传代毒10个代次的TCIDso总趋势为渐变上调的趋势，即随着PRRSV代次的增加，病毒在Marc．145细胞中的增殖速率加快，对细胞的适应性

12、和毒力都增强，与其它三个毒株相比，青海株是毒力最强的。(2)四株PRRSV10个代次间CPE出现的时间总体呈逐渐缩短的趋势，证明了随着PRRSV毒株代次的增加，病毒在Marc．145细胞中的复