红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚psy基因的分离

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1、本科生毕业设计（论文）题目：红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离学院：化学与生命科学学院毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重承诺：所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。作者签名：日期：指导教师签名：日期：使用授权说明本人完全了解大学关于

2、收集、保存、使用毕业设计（论文）的规定，即：按照学校要求提交毕业设计（论文）的印刷本和电子版本；学校有权保存毕业设计（论文）的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。作者签名：日期：目录摘要1英文摘要11引言12材料22.1植物材料22.2实验试剂22.3主要仪器和设备23方法33.1总RNA提取33.1.1常用试剂配制33.1.2器具处理与准备33.1.3提取RNA33.2RNA的纯化43.3RNA提取质量与含量检

3、测43.3.1总RNA的电泳分析43.3.2总RNA含量与纯度测定43.4cDNA链合成53.4.1cDNA一链的合成53.4.2cDNA第二链合成53.5基因的克隆及序列分析63.5.1基因的克隆63.5.2割胶回收63.5.3T-载体连接64结果与分析74.1RNA电泳结果分析74.2RNA紫外分光光度计测定结果分析74.3纯化后RNA电泳结果分析84.4合成cDNA电泳结果分析84.5PSY基因的克隆94.6序列性分析95讨论12参考文献14致谢词16红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离化学与生命科学学院生物科学专业付文佳（05260204）

4、指导老师：杨莉（副教授）摘要：采用改良Bugos法提取红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚成熟果实果肉RNA，逆转录合成cDNA。根据NCBI网站公布的PSY基因全序列设计引物，采用高保真Taq聚合酶进行PCR扩增，将扩增产物连接到pUCm-T载体，转化至大肠杆菌DH5α，并送公司测序。比较发现，红肉蜜柚和琯溪蜜柚果肉PSY基因全长均为1317bp，编码439个氨基酸，序列比对结果显示两者PSY基因与柑桔属PSY基因同源性都相对较高，同源性最高达99%。关键词：红肉蜜柚；琯溪蜜柚；PSY基因；基因分离；序列分析IsolatingPSYGenefromRed-fle

5、shedSweetPomeloandItsParentGuanxiSweetPummeloFUWen-jiaDirector:YANGLi(CollegeofChemistryandLifeScience,ZhejiangNormalUniversity,052No.04)Abstract：ThetotalRNAwasextractedfromtheripefruitofRed-fleshedsweetpomeloandGuanxisweetpomelousingimprovedBugosRNAextractionmethod,thenweresynt

6、hesisedcDNAbyreversetranscriptasekit.Atthesametime,wedesignedprimersforPSYgenesequencesaccordingtotheinformationPSYgenesequencesonNCBI,high-fidelityTaqpolymerasewereusedforPCRamplificationandcDNAasthetemplate.Finally,thePCRproductswereconnectedtopUCm-Tvector,thensequencedandanal

7、yzedthesequences.SequenceanalysisindicatedthatthecDNAfragmentwas1317bp,encodinga439aminoacidproteinandhaved99%identitywiththoseofothercitrusinthehighestlevel.TheresearchingmaybeessentialforthemolecμLarmechanismofPSYgenemutation.KeyWords：red-fleshedsweetpomelo;guanxisweetpummelo;

8、PSYgene;geneisolationing;sequenceanalysis1引言芽变是