folin_酚试剂法测蛋白质含量测定实验报告

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1、范文范例参考生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心完美Word格式整理版范文范例参考实验名称Folin-酚试剂法测蛋白质含量测定实验日期实验地点合作者指导老师评分XX教师签名李某某批改日期2013-06-03格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用TimesNewRoman；标题用：四号，黑体，加粗。需强调的地方请用蓝颜色标出。不得出现多行、多页空白现象。一、实验目的1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。2、掌握制作标准

2、曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。二、实验原理Folin-酚反应是利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基（酚基）还原酚试剂（磷钨酸-磷钼酸）起蓝色反应。为了提高该反应的敏感度，先于标本中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应。1、双缩脲反应：在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC－NH－CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的多个肽键,因此有双缩脲反应。即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋

3、白质-Cu2+复合物。2、Folin-酚显色反应：蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。即根据预先绘制的标完美Word格式整理版范文范例参考准曲线求出未知样品中蛋白质的含量。三、材料与方法：以流程图示意1、材料：样品：健康人的血清（稀释300倍）试剂：牛血清蛋白标准液（200μg/ml）、碱性的硫酸铜溶液、蒸馏水、Folin-

4、酚试剂仪器及器材：V-1100型分光光度计、恒温水浴箱、试管6只、试管架、加样枪、加样枪架、加样枪头2、方法：反应体系设置双缩脲反应Folin-酚反应比色测定试剂（ml）123456牛血清蛋白标准液-0.20.40.60.8-样品液（稀释300倍）-----0.5蒸馏水1.00.80.60.40.20.5碱性硫酸铜溶液2.02.02.02.02.02.0蛋白质的含量（μg/ml）04080120160待测①　取6支试管编号1~6，按下表依次加入试剂并混匀，室温放置10min。表格1Folin-酚试剂定量蛋白质

5、实验步骤②　往6支试管中分别加入Folin-酚试剂0.20ml，在2s内立即混匀。40℃水浴加热10min后，冷却至室温。③　用V-1100型分光光度计以500nm波长比色，用1号管做空白，测量各管吸光度值并记录，每管测量3次。④　数据处理，绘制标准曲线，计算实验结果。四、结果与讨论：①结果：实验数据、现象、图谱；②讨论：以结果为基础的逻辑推论，并得出结论。1、结果①　实验现象：1)加入蒸馏水、蛋白样品和碱性硫酸铜溶液后，溶液均呈无色。完美Word格式整理版范文范例参考1)加入Folin-酚试剂后，溶液均呈黄

6、色。图1水浴前各试管溶液颜色2)水浴后，1号试管溶液呈无色。2号试管到5号试管溶液呈蓝色，且颜色逐渐加深。6号试管溶液颜色介于4号与5号之间，更接近于5号。图2水浴后各试管溶液颜色①　实验数据记录与分析测定次数各管A值2345610.0500.0880.1280.1440.14220.0490.0850.1250.1440.14230.0470.0840.1240.1430.142完美Word格式整理版范文范例参考各管平均值0.0490.0860.1260.1440.142表格2500nm波长吸光度值记录12

7、345C（μg/ml）04080120160A（吸光度）00.0490.0860.1260.144表格3绘制标准曲线数据表标准曲线图①　实验结果计算：由标准曲线图可得，标准曲线方程为y=0.001x。由实验测得样品管（6号试管）的吸光度为0.142，即y6=0.142，代入标准曲线方程中可求得C6’=0.142/0.001=142μg/ml。即样品管中的蛋白质浓度为142μg/ml。由于血清被稀释了300倍，在实验中根据化学定量原则再稀释2倍。因此，健康人血清中蛋白质浓度C6=142*300*2=85200u

8、g/ml=85.200g/L。最终通过实验测得健康人血清中蛋白质浓度为85.200g/L。2、分析①　最终实验结果超出正常范围（正常人血清蛋白浓度范围为60~80g/L）。可能的原因有：完美Word格式整理版范文范例参考1）酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用,导致蛋白质偏高。2）实验操作不当。3）从标准曲线图来看，前四个点基本在一条直线上，第五个点偏差较大。由此猜