玉米赤霉烯酮降解酶多拷贝表达载体构建及其毕赤酵母高效表达

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1、实用标准文案多拷贝玉米赤霉烯酮降解酶在毕赤酵母的分泌表达王义春江均平（农业部农产品加工综合性重点实验室，中国农业科学院农产品加工研究所，北京100193）摘要：本研究通过多拷贝克隆技术实现玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）降解酶基因（zlhy-6）在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达。基因序列根据酵母密码子偏爱性优化后与α因子信号肽编码序列一起合成（即α-zlhy-6），插入到pA0815中，并构建pA0815-（α-zlhy-6）4多拷贝表达载体，转化毕赤酵母GS115后进行诱导表达，并对表达产物进行鉴定。结果表

2、明，酶切证实成功构建了α-zlhy-6多拷贝毕赤酵母表达载体pAO815-（α-zlhy-6）4，利用SDS-PAGE法检测到表达产物在30kDa附近出现条带，与预期值相符。活性测定表明重组酶具有较高降解ZEN的能力。重组酶对水溶液中ZEN的降解率可达到97.5%以上，对玉米碴中ZEN的降解率达到75.51%左右。关键词：玉米赤霉烯酮；降解；基因表达；毕赤酵母ConstructionofaMulti-CopySecretoryExpressionVectorandExpressionofZENDegradationEnzym

3、einPichiapastorisWangYichun,JiangJunping(KeyLaboratoryofAgro-ProductsProcessing,MinistryofAgriculture,InstituteofAgro-ProductsProcessingScience&Technology,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing,100193)Abstract:Inthiswork,amulti-copymethodforsecretedexpressio

4、nofZearalenonedegradationenzymeencodedbyzlhy-6wasdeveloped.Zlhy-6optimizedaccordingtocodonpreferenceofPichiapastoriswassyntheticedalongwithalpha(α)signalpeptidegeneandclonedintopAO815.Themulti-copyexpressionvectorpAO815-(α-zlhy-6)4wasconstructed.Therecombinantwastr

5、ansformedintoP.pastorisstrainGS115forinductionexpressionandthentheactivityofsecretedproductswasidentified.Accordingtotheresults,anewmulti-copyvectorpAO815-(α-zlhy-6)4wassuccessfullyconstructedandwascapableofsecretingrecombinantenzymeefficiently,whichwasconfirmedbye

6、nzymedigestionandSDS-PAGErespectively.TherecombinantenzymepossessedhighactivityofZEN-degradation.Thedegradationrateof97.5%and75.51%wereachievedintheaqueoussolutionandinthecorn,respctively.Keywords:Zearalenone;Degradation;Geneexpression;Pichiapastoris;玉米赤霉烯酮(Zearale

7、none，ZEN)，又称F-2毒素，2,4-二羟基苯甲酸内酯类化合物，主要由禾谷镰刀菌产生的一种霉菌毒素。ZEN具有雌激素活性，对生殖发育系统有毒害作用。摄入ZEN超标的母猪会出现外阴和乳腺肿大甚至阴道及直肠脱垂的症状[1]。ZEN有致癌性，能导致DNA收敛、染色体断裂[2]，还可能通过雌激素受体通路和抑制凋亡促进人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的体外增殖[3]。JianYing等[4]研究发现ZEN能导致老鼠变态数精子增加、精子的活力下降同时受孕降低。梁梓森等[5]研究证明ZEA有血液毒性，小鼠试验中，ZEN可通讯作者，

8、E-mail:1367858907@qq.comCorrespondenceauthor,通讯作者，E-mail:1367858907@qq.com精彩文档实用标准文案导致淋巴细胞明显减少(P<0.05)，白细胞及其他各组分细胞升高，血小板数量明显减少。目前ZEN的降解方法主要有物理法（