生产gaba乳酸菌的筛选及其相关特性研究-发酵工程专业毕业论文

《生产gaba乳酸菌的筛选及其相关特性研究-发酵工程专业毕业论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：园子心单位代码：10422密级：学号：201211685∥声东只客SHANDONGUNTVERSll’Y硕士学位论文ThesisforMasterDegree论文题目：生产GABA乳酸菌的筛选及其相关特性研究ScreeningandcharacteristicsofGABA-producinglacticacidbacteria作者姓名高晓彤培养单位生命科学学院专业名称发酵工程指导教师孔健教授合作导师2015年osfl18日万方数据原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不

2、包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：筮垮～一日期：掣关于学位论文使用授权的声明本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：聊张坳红期：巡万方数据L11东大学硕士学位论文目录摘要IAbstract．．．．．．．．．．10，符号说明及缩

3、写词一VIII第章绪论11．1乳酸菌的概述11．1．1乳酸菌简介．11．1．2乳酸杆菌．21．1'3嗜热链球菌．21．21，氨基丁酸．31．2．1^r氨基丁酸的简介．．31．2f2GABA的生理功能．31．2．3GABA的代谢途径．51．2．4产生GABA的乳酸菌61．3谷氮酸脱羧酶71．3．I谷氨酸脱羧酶概述．71．3．2乳酸菌GAD的性质．．81．3．3乳酸菌GAD操纵子．．91．3．4乳酸菌GAD的功能101．4GABA的生产．．111．4．1化学合成法ll1．4．2植物富集法111．4．3微生物发酵法121．5GABA的检测．．141．5．1纸层析法141

4、．5．2Berthelot比色法15万方数据山东大学硕士学位论文1．5．3氨基酸分析仪／高压液相色谱．．151．6本课题的研究思路与内容．．16第二章生产GABA乳酸菌的筛选172．1前言一172．2材料182．2．1菌株：手l{质粒182．2．2试剂利培养基l82．2．3材料祠1仪器182．3实验方法一l92．3．1菌株活化192．3．2生产GABA菌株的初步鉴定．．192．3．3粗酶液中谷氨酸脱羧酶酶活测定202．3．4乳酸菌染色体提取202．3．5序列引物设计212．3．6PCR扩增与产物纯化．．212．3．7EcoliDH5a感受态细胞的制备与转化．．21

5、2．4实验结果．．222．4．1GABA检测方法的确立222．4．2利用纸层析法进行菌种初筛242．4．3谷氨酸脱羧酶酶活测定262．4．4嗜热链球菌产生GABA能力的普遍性分析～262．4．5序列检测与比对272．5小结与讨论29筇三章谷氨酸脱羧酶的酶学性质．333．1引言．333．2材料333．2．1菌株和质粒333．2．2试剂和培养綦343．2．3材料和仪器34万方数据山东大学硕士学位论文3．3实验方法一343．3．1驷抛序列的表达引物设计与克隆．343．3．2PCR体系与程序与产物的胶回收纯化．．3533．3质粒构建353．3．4GAD的诱导表达．363_

6、3．5利用Ni+柱进行蛋白的纯化363．3．6SDS—PAGE检测363。3。7GAD200和GAD201酶活测定373．3．8GAD201最适温度和最适PIt的测定383．3．9GA201温度稳定性和pH稳定性的测定383．3．10GAD20l的Km和Vmax值．．383，3．11金属离子及化合物对GAD201谷氨酸脱羧酶的影响383．4实验结果一393．4．1载体构建393．4．2谷氨酸脱羧酶在Ecoli中的表达与纯化．393．4．4GAD201最适温度和最适PH的测定4l3．4．3GAD201温度、pH耐受性．423．4．4金属离子及化合物对酶活的影晌423

7、．4．5GAD201的酶学系数433．5小结与讨论一44第四章酸胁迫条件下GAD对&thermphilusSDMCC05020t的保护作用．454．1引言．．454．2材料．454．2．1菌株和质粒454．2．2试剂和培养基464．2．3材料和仪器464．3实验方法一464．3．1羽c箔上下游基因的克隆．464-3．2敲除质粒的构建48万方数据山东大学硕士学位论文4．3-3乳酸菌质粒的提取．484．3．4Lc．]actis感受态的制备与电转化494．3．5Sthermphilus感受态的制备与电转化一494．3．6gadB的基因敲除．504．3．7Sthermph

8、ilusS