《dna遗传标记》word版

《《dna遗传标记》word版》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、DNA遗传标记特点：1.直接反映基因特征，非推测。2.基因座位数量多，无论表达与否。3.多态性程度高，等位基因多，鉴别能力强。4.适合于陈旧的样品，检测能力强。5.灵敏度高，有利于微量样品的检测。6.易于检测手段的自动化、标准化，重复性好。逐渐取代了蛋白质水平的检测方法。第一部DNA基础一、DNA结构与特征1.DNA分子结构线性大分子-基本单位为脱氧核苷酸组成----碱基、脱氧核糖、磷酸差别----碱基：嘌呤碱—腺嘌呤（A）与鸟嘌呤（G）。嘧啶碱—胞嘧啶（C）与胸腺嘧啶（T）。结构：碱基+脱氧核糖=脱氧核苷-+磷酸=脱

2、氧核苷酸2.DNA理化性质1）DNA的变性变性（denaturation）:在一定条件下，DNA双链间氢键断裂，形成单链结构的过程。也称退火（annealing）。条件：A：温度上升----Tm值(meltingtemperature)50%DNA分子解链的温度。与GC/TA比值有关。1%GC-0.4℃。B：碱性升高---0.5NNaOH-完全解链。2）DNA的复性复性（renaturation）撤除变性条件后，变性的单链DNA根据碱基互补的原则，恢复成DNA双链的过程。条件：A：温度降低—过低易错配。过高不易复性。B

3、：高离子强度。3）DNA分子杂交杂交（hybridization）：来源不同的两条DNA单链根据碱基互补的原则，形成双链杂种DNA的过程。一、基因1.基因与基因组基因（gene）：合成有功能的蛋白质多肽链或RNA所需的全部核苷酸序列。基因组（genome）:一个生物体的所有基因。核基因组：细胞核中23对染色体包含的所有基因。线粒体基因组：线粒体DNA中的所有基因。2.基因结构结构基因：能够编码产生蛋白质产物的基因。外显子（exon）：编码序列。内含子(intron)：非编码序列（间隔序列）。如β珠蛋白-1700碱基（b

4、p），编码146个氨基酸，3个外显子，2个内含子。3.基因突变突变（mutation）：DNA分子中的核苷酸序列的改变。1）点突变（pointmutation）：单碱基置换。同义突变（samesensemutation）:简并密码，无突变效应。错义突变(missensemutation)：新密码子，氨基酸序列变化，产生突变效应。无义突变(non-sensemutation)：变成终止密码，合成不完整多肽，产生突变效应。终止密码突变（terminatorcodonmutation)：合成过长的多肽，产生突变效应。移码突变

5、（frame-shiftmutation)：DNA链中插入1个或几个单碱对，使突变处以下部位密码发生变化，使合成的氨基酸种类或序列变化，产生突变效应。2）片段突变：DNA链中小片段单碱序列发生缺失、重复或重排，产生突变效应。二、DNA多态性的分类1）长度多态性：等位基因片段长度的个体差别。由一特定序列，首尾相连串联重复次数不同产生的个体差别。可变数目串联重复（variablenumberoftandemrepeat,VNTR）短串联重复(shorttandemrepeat,STR)A：产生原因：DNA滑动与同源染色体不

6、等交换。B：差别：VNTRSTR重复序列组成2-7bp7-数十bp重复序列数目2-10数个10数个-数百个鉴别能力高极高优势扩增现象不明显极明显检测灵敏度极高稍差片段总长度200-500bp数千以上bpC：STR的命名：非编码区-D3S1358D3第三号染色体S单拷贝（singlecopy）1358VNTR序列的发现序号编码区内含子-HumHPRTB次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因（hypoxanthinephosphoribosyltransferase）1）序列多态性：DNA片段碱基排列顺序的个体差别。单核苷酸多态性（s

7、inglenucleotidepolymorphism,SNPs）原因：碱基的置换、插入、缺失。特点：多位于非编码区，选择压力。数量多，1/1000bp，300万二态性，2个等位基因，多态性程度较低。孤立事件，人类遗传学意义大。第二部分DNA置备核心与关键脑》肺》肌肉》肾6pg/细胞一、理想DNA样品的要求1.纯度-RNA、蛋白质、多糖、脂类。2.完整性-DNA大分子。3.DNA量。Μg/指纹图；ng/PCR；pg/PCR二、经典DNA提取法1.在弱碱和螯合剂的条件下行组织匀浆，溶解胞、核膜。2.去垢剂与蛋白酶消化蛋白

8、，分离DNA。3.有机溶剂去除蛋白，萃取DNA。4.乙醇与盐类沉淀DNA。三、试剂的使用原理1.弱碱和螯合剂：Tris-HClpH8.0，DNA分子稳定。EDTA（乙二胺四乙酸）-抑制核酸酶。通过螯合镁离子。2.去垢剂与蛋白酶：SDS（十二烷基磺酸钠）增加膜通透性；促进DNA与蛋白质分解；促使核酸酶与蛋白质变性。蛋白酶K，酶解组蛋